維氏氣單胞菌（Aeromonas veronii,A.veronii）是一種能夠感染人-獸-水生動(dòng)物的革蘭氏陰性病原菌。分布廣泛,具有較強(qiáng)的致病性,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。關(guān)于A.veronii的研究呈上升趨勢(shì),且致病性增強(qiáng)的報(bào)道也逐年增多。核苷二磷酸激酶（nucleoside diphosphate kinase,ndk）是由ndk基因編碼的一種高保守性多功能蛋白,主要功能是通過(guò)磷酸基轉(zhuǎn)移反應(yīng)維持細(xì)胞內(nèi)ATP和NTP濃度的平衡,參與UTP和GTP生物合成過(guò)程。研究表明ndk基因能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、發(fā)育和凋亡,還能夠調(diào)節(jié)細(xì)菌的毒力。ilvI基因編碼的蛋白為乙酰乳酸合酶（ALS）,它是植物、真菌和細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)支鏈氨基酸Val、Leu、Ile生物合成過(guò)程中關(guān)鍵酶,其活性的發(fā)揮需要TPP、FAD和二價(jià)金屬離子。目前對(duì)該酶的研究主要集中于植物,尤其是除草劑類(lèi)。除草劑類(lèi)化合物通過(guò)阻斷ALS酶的活性,從而阻斷了支鏈氨基酸的合成,導(dǎo)致蛋白質(zhì)的合成受到破壞,進(jìn)而影響生物的生長(zhǎng)甚至死亡。而A.veronii中關(guān)于ndk和ilvI的研究尚屬空白。因此,研究ndk與ilvI基因?qū).veronii毒力... 

【文章來(lái)源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pRE112-N1N2重組自殺性質(zhì)粒的構(gòu)建

和氯霉素（Cm）的 LB 固體培養(yǎng)基上。溫箱 37 ℃培養(yǎng)后挑取菌落培養(yǎng)，目的引物擴(kuò)增得到 1925 bp 的條帶（圖 1.3A）。經(jīng)接合轉(zhuǎn)移發(fā)生一次同上的菌落培養(yǎng)，以 ndk-up-F/ndk-down-R 引物進(jìn)行菌液 PCR 篩選，從中陽(yáng)性克隆子（圖 1.3B）。經(jīng)發(fā)生二次同源重組后通過(guò)抗性板篩選，挑取單 DNA，再次進(jìn)行 PCR 驗(yàn)證，所得結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致（圖 1.3C），表因缺失成功。似缺失突變株進(jìn)行 RNA 水平的驗(yàn)證，首先進(jìn)行 RNA 的提取，然后將 cDNA，并以其為模板，ndk 基因使用 ndk-Pr1/ndk-Pr2 和 ndk-Pr3/ndk-P 16s 通用引物對(duì)陽(yáng)性菌株進(jìn)行 PCR 驗(yàn)證（圖 1.4A、B、C），并以野生株 對(duì)照，所得條帶大小證明基因缺失成功。

圖 1.4：ndk 缺失株 RNA 水平的驗(yàn)證1-5:缺失株，6:野生株；B：ndk-Pr1/ndk-Pr2 引物驗(yàn)證，1C：ndk-Pr3/ndk-Pr4 引物驗(yàn)證，1-5:缺失株，6:野生株；Fig.1.4 Functional of ndk deletion in RNA level primer, 1-5:mutant, 6:wild strain; B: functional of ndk-Pr1/nd strain;C: functional of ndk-Pr3/ndk-Pr4 primer, 1-5:mutant, 6:株的構(gòu)建段和啟動(dòng)子片段的擴(kuò)增0426 基因組為模板，ndk 基因以 ndk-Po1/ndk-Po得大小約為 696 bp 的 No 片段（圖 1.5A），純化后，提取質(zhì)粒 PCR 驗(yàn)證（圖 1.5B），所得結(jié)果與

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2017年腸道門(mén)診分離氣單胞菌MLPA分型及臨床特征分析[J]. 周妍妍,南征,耿子昕,李靜,閆東輝,蘇建榮.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2018(24)
[2]腸炎沙門(mén)菌luxS缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究[J]. 于艷超,王莉莉,潘巧,辛九慶,王秀梅.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(06)
[3]細(xì)菌鞭毛在生理活動(dòng)中的作用[J]. 李交昆,南美花,吳學(xué)玲,余潤(rùn)蘭,曾偉民.  生命科學(xué). 2018(06)
[4]一例懷頭鯰維氏氣單胞菌腸炎病例報(bào)告[J]. 徐金鋮,胡秀彩,呂愛(ài)軍,孫敬鋒,宋亞嬌,劉小雪,王曉梅,石洪玥.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(04)
[5]鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜對(duì)抗菌藥物耐藥性的影響[J]. 藺飛,杜冰潔,高燦,凌保東.  中國(guó)感染控制雜志. 2018(01)
[6]鼠傷寒沙門(mén)菌SL1344株分泌性蛋白K1缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性的初步研究[J]. 楊亞?wèn)|,張春杰,程相朝,丁軻,李銀聚,郁川,廖成水,陳松彪,王二鑫,張曉潔.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2017(09)
[7]植物核苷二磷酸激酶研究進(jìn)展[J]. 朱馨妮,汪珊珊,周佳琴,朱世華.  生物技術(shù)通報(bào). 2017(11)
[8]巖原鯉致病性維氏氣單胞菌的分離與鑒定[J]. 朱成科,劉桂嘉,張爭(zhēng)世,蒲德成,朱龍,周朝偉,雷駱,鄭宗林.  中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2017(06)
[9]利用玉米乙酰乳酸合成酶基因ALS點(diǎn)突變處理培育抗除草劑高粱[J]. 朱振興,李丹,王春語(yǔ).  分子植物育種. 2017(11)
[10]細(xì)菌生物被膜檢測(cè)方法及評(píng)估[J]. 劉鑫,陳楓,黃璨,余玥,王曉燕,黃永茂,程錦楠.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2016(21)

博士論文
[1]核苷二磷酸激酶調(diào)節(jié)銅綠假單胞菌毒力及致病性的機(jī)制研究[D]. 余華.第三軍醫(yī)大學(xué) 2016
[2]乙酰羥酸合成酶亞基間相互作用的研究[D]. 趙躍芳.南開(kāi)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]靶向AHAS酶抑制劑的篩選及抗結(jié)核分支桿菌活性的研究[D]. 丁修冬.吉林大學(xué) 2017
[2]植物病原真菌乙酰乳酸合成酶（ALS）及其抑制劑的研究[D]. 葉朝燕.浙江大學(xué) 2014
[3]禾谷鐮刀菌支鏈氨基酸合成基因FgILV5的生物學(xué)功能研究[D]. 王健.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]四川地區(qū)斑點(diǎn)叉尾鮰源維氏氣單胞菌的耐藥性以及耐藥基因檢測(cè)分析[D]. 趙敏.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[5]NDPK-A及其Cys突變體對(duì)A549細(xì)胞增殖、周期及凋亡的影響[D]. 高雪.暨南大學(xué) 2011
[6]核苷二磷酸激酶在響應(yīng)菲脅迫中的功能分析[D]. 譚龍.福建農(nóng)林大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3024334