流行性乙型腦炎（Japanese encephalitis,JE）是由流行性乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一種蚊媒性人獸共患病。JEV可感染人與多種動(dòng)物,主要的傳播媒介為三帶喙庫(kù)蚊,通過(guò)蚊蟲(chóng)的叮咬在宿主之間傳播,水鳥(niǎo)和豬為主要的擴(kuò)大宿主,人為終末宿主。目前流行性乙型腦炎仍沒(méi)有有效的治療方法,以預(yù)防為主,主要是通過(guò)接種疫苗進(jìn)行預(yù)防。雖然流行性乙型腦炎目前已得到有效的控制,但對(duì)于流行性乙型腦炎病毒的復(fù)制周期的研究仍有許多空白,對(duì)于宿主因子在病毒復(fù)制周期中的不同階段發(fā)揮的作用仍不清楚。Sec62/Sec63復(fù)合體由Sec62蛋白和Sec63蛋白組成,為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的跨膜蛋白,主要功能是與參與某些蛋白的新生前體多肽向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的Sec61通道中的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。Sec62可以與核糖體相互作用,參與蛋白質(zhì)的翻譯,影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中蛋白質(zhì)的易位過(guò)程,可以引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。Sec63蛋白由3個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域組成,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)J結(jié)構(gòu)域與分子伴侶（Binding Protein,Bip）相互作用,促進(jìn)前體蛋白通過(guò)Sec61通道進(jìn)行易位。為研究Sec62/Sec63復(fù)合物對(duì)JEV復(fù)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 流行性乙型腦炎流行病學(xué)及傳播特征
    1.2 流行性乙型腦炎病毒的基因型
    1.3 流行性乙型腦炎的發(fā)病機(jī)理
    1.4 流行性乙型腦炎的防控
    1.5 分子生物學(xué)
        1.5.1 病毒及基因組結(jié)構(gòu)
        1.5.2 蛋白質(zhì)功能
        1.5.3 JEV入侵及復(fù)制過(guò)程
    1.6 宿主蛋白對(duì)黃病毒復(fù)制影響的研究進(jìn)展
    1.7 研究宿主蛋白對(duì)病毒復(fù)制影響的方法
        1.7.1 RNA干擾技術(shù)研究
        1.7.2 基因編輯技術(shù)研究
        1.7.3 雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)（bimolecular fluorescence complementation,Bi FC）
    1.8 Sec62/Sec63 復(fù)合物
    1.9 研究目的與意義
第二章 SEC62與SEC63 基因敲除細(xì)胞系的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 sgRNA的設(shè)計(jì)與合成
        2.2.2 sgRNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.3 重組質(zhì)粒的培養(yǎng)與提取
        2.2.4 SEC62、SEC63 基因敲除細(xì)胞的克隆篩選
        2.2.5 基因敲除細(xì)胞系的測(cè)序鑒定
        2.2.6 基因敲除細(xì)胞系的western blot鑒定
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 重組質(zhì)粒p Sec62-sg RNA與 p Sec63-sg RNA的構(gòu)建與鑒定
        2.3.2 基因敲除細(xì)胞系靶基因序列測(cè)定結(jié)果
        2.3.3 SEC62 KO HEK-293 細(xì)胞的western blot鑒定
    2.4 討論
第三章 Sec62與Sec63對(duì)JEV復(fù)制影響的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 si RNA干擾SEC62與SEC63對(duì)JEV感染率影響
        3.2.2 SEC62、SEC63基因敲除對(duì)JEV復(fù)制影響
        3.2.3 SEC62、SEC63基因敲除對(duì)JEV基因組復(fù)制的影響
        3.2.4 SEC62、SEC63基因敲除對(duì)JEV E蛋白表達(dá)影響的檢測(cè)
        3.2.5 SEC62、SEC63基因敲除對(duì)JEV子代病毒影響
        3.2.6 雙分子熒光互補(bǔ)檢測(cè)Sec62、Sec63與JEV蛋白的相互作用
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 si RNA干擾SEC62與SEC63 后降低JEV感染率
        3.3.2 SEC62、SEC63基因敲除影響JEV的復(fù)制
        3.3.3 SEC62、SEC63基因敲除對(duì)JEV基因組復(fù)制的影響
        3.3.4 SEC62、SEC63基因敲除影響JEV E蛋白的表達(dá)
        3.3.5 SEC62、SEC63基因敲除對(duì)JEV滴度的影響
        3.3.6 Bi FC檢測(cè)Sec62與Sec63與JEV蛋白的相互作用
    3.4 討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Genome engineering using the CRISPR/Cas system[J]. Takuro Horii,Izuho Hatada.  World Journal of Medical Genetics. 2014(03)
[2]N-糖基化對(duì)乙型腦炎病毒prME和NS1基因免疫效果影響的研究[J]. 張子重,汪雪,宰俊杰,孫樂(lè)強(qiáng),宋云峰,陳煥春.  病毒學(xué)報(bào). 2012(03)

碩士論文
[1]流行性乙型腦炎病毒prM蛋白furin蛋白酶剪切位點(diǎn)突變分析及穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建[D]. 李業(yè)南.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013



本文編號(hào)：3023399