日本腦炎（Japanese encephalitis）,又稱流行性乙型腦炎,簡稱乙腦,是由日本腦炎病毒（Japanses encephalitis virus, JEV）引起的一種人畜共患性傳染病。JEV主要的傳播媒介是庫蚊,對多宿主具有致病作用,人是其終末宿主。JEV不僅引起嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題,且可引起其擴(kuò)大宿主豬的繁殖障礙,對畜牧業(yè)造成很大損失。中國是乙腦高發(fā)的國家。近年來,我國的畜牧業(yè),特別是養(yǎng)豬業(yè)高速發(fā)展,增加了乙腦監(jiān)測的難度和發(fā)生的風(fēng)險。本試驗(yàn)從豬流產(chǎn)胎兒腦組織樣中分離到兩株乙腦病毒,對其生物學(xué)特性進(jìn)行系統(tǒng)的研究；克隆了二者編碼區(qū)序列,與GenBank中其他毒株比較,進(jìn)行了分子生物學(xué)的分析,為乙腦在中國特別是四川省的預(yù)防和控制提供分子流行病學(xué)依據(jù),豐富了乙腦研究的素材。1兩株豬源日本腦炎病毒的分離鑒定采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）對從四川各地采集蚊樣及豬流產(chǎn)死胎樣本進(jìn)行JEV的病原檢測,檢測陽性的樣品腦內(nèi)接種5日齡乳鼠,2批采自大興的流產(chǎn)胎兒樣品均在接種第3代后4天明顯表現(xiàn)出沉郁、拒乳、抽搐并消瘦,第5天衰竭麻痹,最終致死。發(fā)病乳鼠的腦組織取出,研磨離心處理后接種B... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 流行現(xiàn)狀
        1.1 流行范圍
        1.2 流行模式
    2 分型及分布
    3 JEV的培養(yǎng)特性
    4 JEV的分子生物學(xué)特征
        4.1 JEV病毒基因組的結(jié)構(gòu)特征
        4.2 JEV的蛋白質(zhì)組相關(guān)研究
    5 JE疫苗研究概況
        5.1 滅活苗
        5.2 減毒活疫苗
        5.3 基因工程苗
        5.4 減毒活疫苗SA14-14-2面臨的挑戰(zhàn)
    6 研究目的與意義
第二部分 試驗(yàn)研究
    第一章 日本腦炎病毒SCYA201201和SCYA201202株的分離鑒定
        1 材料
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 主要試劑
            1.3 主要試劑的配制
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 樣品的采集
            2.2 樣品的處理
            2.3 樣品的RT-PCR檢測
            2.4 病毒的分離培養(yǎng)
            2.5 病毒的鑒定
        3 結(jié)果
            3.1 病毒分離結(jié)果
            3.2 病毒鑒定結(jié)果
        4 討論
        5 小結(jié)
    第二章 JEV SCYA201201和SCYA201202株編碼區(qū)序列分析
        1. 材料
            1.1 主要毒株、菌株和質(zhì)粒
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 參考毒株
        2 方法
            2.1 病毒增殖
            2.2 引物設(shè)計(jì)
            2.3 RNA提取
            2.4 RT-PCR反應(yīng)
            2.5 目的片段的回收
            2.6 平末端片段加A
            2.7 目的片段的克隆
            2.8 測序結(jié)果分析
        3 結(jié)果
            3.1 SCYA201201、5CYA201202株cDNA的8段PCR擴(kuò)增結(jié)果
            3.2 編碼區(qū)核苷酸序列和編碼氨基酸序列分析
            3.3 SCYA201201、SCYA201202株的進(jìn)化分析
            3.4 氨基酸變異點(diǎn)
        4 討論
        5 小結(jié)
    第三章 JEV分離株生物學(xué)特性初步研究
        1 材料
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 主要試劑
            1.3 主要試劑的配制
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 血凝試驗(yàn)
50測定">            2.2 SCYA201201、SCYA201202株的LD₅₀測定
            2.3 病毒組織嗜性的研究
        3 結(jié)果
            3.1 血凝試驗(yàn)結(jié)果
50的測定結(jié)果">            3.2 LD₅₀的測定結(jié)果
            3.3 SCYA201201株組織嗜性研究結(jié)果
        4 討論
        5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中國首次分離的二株基因Ⅰ型流行性乙型腦炎病毒全基因組序列分析（英文）[J]. 馮云,李燦委,章域震,楊衛(wèi)紅,張海林.  中國人獸共患病學(xué)報. 2013(09)
[2]JEV入侵BHK-21細(xì)胞內(nèi)吞途徑的初步研究[J]. 曹三杰,黃恒,劉凱,石雙艷,黃小波,文心田.  中國人獸共患病學(xué)報. 2013(08)
[3]2004-2010年我國流行性乙型腦炎發(fā)病及死亡的季節(jié)性分析[J]. 郭海強(qiáng),曲波,丁海龍,孫高.  中國媒介生物學(xué)及控制雜志. 2011(03)
[4]2008年甘肅省新分離乙腦病毒的分子生物學(xué)特征[J]. 李銘華,付士紅,馮云,高曉艷,翟友剛,于德山,李國太,賈玉新,梁國棟.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2009 (04)
[5]山東省新分離乙腦病毒（SD08-10株）全基因組序列特征[J]. 高曉艷,王海巖,王環(huán)宇,付士紅,劉桂芳,李巖,李銘華,徐愛強(qiáng),梁國棟.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2009 (04)
[6]浙江省基因Ⅰ型乙腦病毒全基因序列的測定及分析[J]. 謝榮輝,朱函坪,付士紅,程胤凱,徐芳,姚蘋蘋,楊章女,周小龍,朱智勇.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2009 (04)
[7]2008年遼寧省乙腦病毒分離株全基因組特征分析[J]. 曹玉璽,付士紅,王環(huán)宇,潘曉玲,張稷博,梁國棟.  中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2009 (04)
[8]豬源乙型腦炎病毒的分離鑒定及其E基因分析[J]. 鄭浩,張建武,袁世山.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2009(06)
[9]乙型腦炎病毒SXBJ07株的分離鑒定及序列分析[J]. 王韋華,張旭,張彥明,邢福珊,徐彥召.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2009(04)
[10]廣東省乙型腦炎流行特征及其防制策略[J]. 張吉凱,趙占杰,邵曉萍,梁劍,鄒遠(yuǎn)聞.  中國人獸共患病學(xué)報. 2008(10)



本文編號：3022566