為進(jìn)一步研究大腸桿菌菌蛻的制備技術(shù),以pBV221、pCold IV和pETDuet1載體為基礎(chǔ)構(gòu)建了表達(dá)噬菌體E基因的溶菌質(zhì)粒,并利用pETDuet1的2個多克隆位點(diǎn)構(gòu)建了同時表達(dá)E基因和金黃色葡萄球菌核酸酶A的雙表達(dá)溶菌質(zhì)粒。經(jīng)檢測,pBV221-E/DH_5α組和pCold-E/BL₂₁組的裂解效率最高,但pCold-E/BL₂₁組的裂解起始時間晚于其他幾組。誘導(dǎo)劑的濃度對pETDuet1-E-SNA/BL₂₁（DE3）的裂解效率有較大影響。電泳結(jié)果顯示,隨著E基因的表達(dá),細(xì)菌DNA逸出膜外,同時金黃色葡萄球菌核酸酶A將DNA降解為250 bp以下的小片段。除pBV221-E/BL₂₁組外,β-丙內(nèi)酯可實現(xiàn)對其他試驗組菌蛻的完全滅活。電鏡觀察發(fā)現(xiàn),幾組菌蛻在結(jié)構(gòu)上并無明顯差別。與對照菌相比,菌蛻結(jié)構(gòu)完整,電子密度低且不均勻,細(xì)胞膜有不同程度的皺縮。 

【文章來源】：江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2020,36(02)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒的酶切鑒定

通過涂板檢驗發(fā)現(xiàn),經(jīng)β-丙內(nèi)酯滅活處理后pBV221-E/BL21菌蛻溶液中仍有活菌存在,而pBV221-E/DH5α、pCold-E/BL21、pETDuet1-E/BL21(DE3)和pETDuet1-E-SNA/BL21(DE3)4種菌蛻溶液中無活菌。圖3 大腸桿菌BL21(DE3)誘導(dǎo)前后DNA電泳分析

大腸桿菌BL21(DE3)誘導(dǎo)前后DNA電泳分析


本文編號：3021728