Musclin是由骨骼肌特異性分泌的一種蛋白,有報道顯示它的表達(dá)受到多種因素的影響,其生理作用與糖代謝、脂肪代謝有關(guān)。目前有關(guān)musclin基因的研究報道較少,有關(guān)musclin對未分化成肌細(xì)胞增殖、葡萄糖攝取和氨基酸分解代謝的作用及其機(jī)制尚未見有研究報道。因此,本試驗旨在利用過表達(dá)和RNA干擾技術(shù)來闡明以上問題,以為最終闡明musclin在成肌和肌肉發(fā)育過程中的作用及機(jī)制奠定基礎(chǔ),也為畜禽和人類的健康提供依據(jù)。試驗一：本試驗共分為七組：Untreated control、pcDNA vector、pcDNA-musclin、 Control siRNA、Musclin siRNA、pcDNA vector+Control siRNA、pcDNA-musclin+Musclin siRNA。分別進(jìn)行細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染后收集培養(yǎng)液和細(xì)胞,進(jìn)行了相關(guān)檢測。結(jié)果表明：（1） musclin熒光定量PCR結(jié)果顯示：與未轉(zhuǎn)染的正常組相比,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）的過表達(dá)對照組、轉(zhuǎn)染Control siRNA的干擾對照組、轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）和Control siRNA的過表達(dá)對照+干擾對... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
前言
文獻(xiàn)綜述
    1 骨骼肌與糖代謝
        1.1 PI3K-AKT通路
        1.2 GLUT4
        1.3 PPARγ-LXRα通路
    2 Musclin基因的研究進(jìn)展
        2.1 Musclin基因的發(fā)現(xiàn)和結(jié)構(gòu)
        2.2 Musclin基因的生物學(xué)功能
    3 肌衛(wèi)星細(xì)胞研究進(jìn)展
本研究的立項依據(jù)和研究意義
試驗一 Musclin基因過表達(dá)和沉默成肌細(xì)胞增殖、葡萄糖攝取、氨基酸分解及其相關(guān)基因表達(dá)的影響及其作用機(jī)制
    1 試驗材料
        1.1 細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 常用試劑配制
    2 試驗方法
        2.1 小鼠C2C12細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        2.2 pcDNA3.1（+）-musclin真核表達(dá)載體和pcDNA3.1（+）的無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA提取
        2.3 小鼠C2C12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        2.4 細(xì)胞RNA提取
        2.5 RNA電泳
        2.6 反轉(zhuǎn)錄
        2.7 熒光定量PCR
            2.7.1 熒光定量PCR的引物
            2.7.2 RT-PCR反應(yīng)用量及反應(yīng)條件
        2.8 營養(yǎng)指標(biāo)測定
            2.8.1 培養(yǎng)液中葡萄糖濃度的測定
            2.8.2 培養(yǎng)液中尿素氮濃度測定
    3 結(jié)果與分析
        3.1 小鼠成肌細(xì)胞C2C12瞬時轉(zhuǎn)染試驗的效率結(jié)果
        3.2 不同轉(zhuǎn)染組小鼠成肌細(xì)胞RNA提取結(jié)果
        3.3 不同處理組中musclin mRNA表達(dá)差異
        3.4 Musclin基因表達(dá)差異對小鼠成肌細(xì)胞增殖的影響
        3.5 Musclin基因表達(dá)差異對營養(yǎng)指標(biāo)的影響
            3.5.1 Musclin基因過表達(dá)和沉默對培養(yǎng)液中葡萄糖含量的影響
            3.5.2 Musclin基因過表達(dá)和沉默對培養(yǎng)液中尿素氮含量的影響
        3.6 Musclin基因過表達(dá)和沉默對各相關(guān)基因表達(dá)的影響
            3.6.1 不同轉(zhuǎn)染組AKT1 mRNA表達(dá)的差異
            3.6.2 不同轉(zhuǎn)染組AKT2 mRNA表達(dá)的差異
            3.6.3 不同轉(zhuǎn)染組PI3K p110 mRNA表達(dá)的差異
            3.6.4 不同轉(zhuǎn)染組PPARγ mRNA表達(dá)的差異
            3.6.5 不同轉(zhuǎn)染組LXRα mRNA表達(dá)的差異
            3.6.6 不同轉(zhuǎn)染組GLUT4 mRNA表達(dá)的差異
    4 討論
        4.1 關(guān)于實時熒光定量PCR
        4.2 Musclin基因的過表達(dá)和沉默效果
        4.3 Musclin基因過表達(dá)和沉默對細(xì)胞增殖的作用
        4.4 Musclin基因過表達(dá)和沉默對葡萄糖和尿素氮的影響
        4.5 Musclin基因過表達(dá)和沉默對相關(guān)基因表達(dá)的影響
試驗二 綿羊骨骼肌肌衛(wèi)星細(xì)胞的分離與鑒定
    1 試驗材料
        1.1 動物組織
        1.2 細(xì)胞試驗相關(guān)試劑和分子生化試劑
        1.3 試驗儀器
        1.4 常用試劑的配制與緩沖液
    2 試驗方法
        2.1 綿羊骨骼肌肌衛(wèi)星細(xì)胞的原代培養(yǎng)與純化
        2.2 綿羊骨骼肌肌衛(wèi)星細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        2.3 綿羊肌衛(wèi)星細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇
        2.4 綿羊肌衛(wèi)星細(xì)胞的鑒定
            2.4.1 Myostatin基因的擴(kuò)增
                2.4.1.1 細(xì)胞RNA的提取
                2.4.1.2 RNA電泳
                2.4.1.3 反轉(zhuǎn)錄
                2.4.1.4 RT-PCR擴(kuò)增綿羊Myostatin基因
            2.4.2 Desmin細(xì)胞免疫化學(xué)
            2.4.3 綿羊肌衛(wèi)星細(xì)胞的分化
    3 結(jié)果與分析
        3.1 RNA提取結(jié)果
        3.2 綿羊Myostatin基因PCR擴(kuò)增
        3.3 Desmin細(xì)胞免疫化學(xué)
        3.4 綿羊肌衛(wèi)星細(xì)胞細(xì)胞分化結(jié)果
    4 討論
        4.1 綿羊肌衛(wèi)星細(xì)胞內(nèi)Myostatin基因的PCR擴(kuò)增
        4.2 關(guān)于免疫細(xì)胞化學(xué)
        4.3 有關(guān)細(xì)胞分化
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
Abstract
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖及分化影響因素研究進(jìn)展[J]. 張蔚菁,賈懿劼,田京.  國際骨科學(xué)雜志. 2013(02)
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[3]有氧運動對2型糖尿病大鼠血清Musclin含量的干預(yù)作用研究[J]. 鄧玉強(qiáng),唐智明.  浙江體育科學(xué). 2012(02)
[4]PI3K-Akt信號傳導(dǎo)通路對糖代謝的調(diào)控作用[J]. 遲毓婧,李晶,管又飛,楊吉春.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2010(10)
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[6]長期高脂飼養(yǎng)大鼠骨骼肌musclin表達(dá)上調(diào)及其與胰島素抵抗的相關(guān)性[J]. 曹玲玲,袁莉,徐江祥,劉志強(qiáng),王霞,張貝,邱海燕,徐國玲,唐兆生.  中華內(nèi)分泌代謝雜志. 2009 (02)
[7]骨骼肌脂肪酸代謝與胰島素抵抗[J]. 高宇,宋光耀.  中國老年學(xué)雜志. 2009(03)
[8]肌肉素干預(yù)大鼠骨骼肌葡萄糖攝取與NF-κB的相關(guān)性[J]. 劉英,宗志紅,劉國良.  同位素. 2007(04)
[9]肌源干細(xì)胞研究進(jìn)展[J]. 李俊玲,王世立,韓金祥.  中國生物工程雜志. 2007(05)
[10]葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4表達(dá)調(diào)節(jié)及與糖尿病的關(guān)系[J]. 曹永紅,王長江.  中國臨床保健雜志. 2007(01)

博士論文
[1]LXRs激動對PPARγ轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)脂肪因子表達(dá)的作用及機(jī)制研究[D]. 鄭芬萍.浙江大學(xué) 2011
[2]肌肉素（Musclin）對大鼠分化的成肌細(xì)胞葡萄糖攝取的影響及其分子機(jī)制的實驗研究[D]. 劉英.中國醫(yī)科大學(xué) 2008

碩士論文
[1]胰島素信號通路中GLUT4的作用機(jī)制研究[D]. 高勇.浙江大學(xué) 2006



本文編號：3015362