2009年，墨西哥流感爆發(fā)，隨后便席卷全球，引起了全球性的恐慌，值得慶幸的是，2009/H1N1的致病能力有限，并未給人類帶來災(zāi)難性的損失。H5N1亞型高致病性禽流感（HPAIV）一直在我國存在，近年來呈散發(fā)性流行，給我國的養(yǎng)禽業(yè)帶來了一定的經(jīng)濟(jì)損失。若2009/H1N1和H5N1HPAIV重組，可能會(huì)給養(yǎng)禽業(yè)和人類帶來難以估量的影響。為研究NS基因?qū)α鞲胁《局虏×皞鞑ツ芰Φ挠绊�，本�?shí)驗(yàn)以一株H5N1禽流感病毒A/duck/Guangxi/35/2001（H5N1; DK/35）為親本病毒株，利用反向遺傳技術(shù)，以我國首例甲型H1N1流感病毒分離株A/Sichuan/01/2009（SC/01）的NS基因?qū)K/35進(jìn)行單基因替換，拯救出一株H5N1禽流感病毒重組病毒DK/35-SC/01-NS。小鼠實(shí)驗(yàn)表明，DK/35的MLD50為2.6log10EID50而DK/35-SC/01-NS為5.9log10EID50，兩者間的毒力相差2000倍。為了進(jìn)一步研究毒力降低的原因，我們用VSV-GFP法對(duì)病毒I型IFN的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明，DK/35能抑制IFN的產(chǎn)生，VSV-GF... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

流感病毒結(jié)構(gòu)

C 端效應(yīng)結(jié)構(gòu)域位于第 74-230 氨基酸處，其能夠介導(dǎo)與多種宿主蛋白的相互作穩(wěn)定 RBD 的作用( Wang et al., 2002)。RBD 是一個(gè)單獨(dú)的對(duì)稱的同源二聚體，每個(gè)單旋組成，二聚體結(jié)構(gòu)是結(jié)合 dsRNA 必須的，RBD 與 dsRNA 以 1:1 的比率結(jié)合( ChienNS1 蛋白上的氨基酸 Asp-34、Arg-35、Arg-38、Lys-41、Gly-45、Arg-46 和 Thr-49 可接介導(dǎo) RBD 與 RNA 的作用，其中 Arg-38 和 Lys-41 對(duì)結(jié)合 RNA 非常重要。效應(yīng)結(jié)獨(dú)立的同源二聚體，每個(gè)單體由 7 個(gè)β折疊和 3 個(gè)α螺旋組成。NS1 是一種多功能蛋種活性，與病毒的復(fù)制和毒力有關(guān)，其作用包括：（1）調(diào)節(jié)病毒 RNA（vRNA）的控 vRNA 的剪切；（3）調(diào)節(jié)病毒粒子的形態(tài)；（4）抑制宿主的細(xì)胞凋亡和免疫反應(yīng)酸肌醇 3 激酶（PI3K）。所有的這些功能都是基于 NS1 的蛋白與蛋白及蛋白與 RNA實(shí)現(xiàn)的。NS1 有兩個(gè)和定位序列（NLS1 和 NLS2）及一個(gè)核輸出序列（NES），某些核仁定位序列(NoLS)，NoLS 與 NLS2 相伴。Arg-38 與 Lys-41 與 OAS/RNase L、Jun酶及 RIG-I 的抑制有關(guān)。另外，NS1 具有與多種細(xì)胞蛋白結(jié)合的位點(diǎn)，這些蛋白包括：合蛋白 I (PABPI)、p85β、 內(nèi)輸?shù)鞍爪粒╥mportin-α）、核仁素（nucleolin）、NS1- hStaufen、 NS1-I、PKR、PACT、CPSF30、PABPII、Crk/CrkL、具有 PDZ 結(jié)構(gòu)域聚合酶、細(xì)胞 mRNA 核輸出機(jī)制成份 (E1B-AP5, p15, NXF1 及 Rae1)( Hale et al., 2

18B3 C31 和 A2 為對(duì)照；B1-B3 為 DK/35,B1 為 100稀釋度，B2為 10-1稀釋度，B3為10-2稀釋度；C1-C3為DK/35-SC1 為 100稀釋度，C2 為 10-1稀釋度，C3 為 10-2稀釋度。圖 2.3 VSV-GFP 表達(dá)情況Fig. 2.3 The expression of VSV-GFP


本文編號(hào)：3014841