為建立犬呼吸道冠狀病毒（Canine respiratory coronavirus,CRCoV）、犬細(xì)小病毒（Canine parvovirus,CPV）、犬瘟熱病毒（Canine distemper virus,CDV）3種病毒的多重PCR方法,根據(jù)GenBank中CRCoV、CPV和CDV的基因序列,進(jìn)行BLAST同源性分析,找出保守序列,并根據(jù)保守序列對(duì)每個(gè)病毒設(shè)計(jì)引物,建立擴(kuò)增3種病毒的多重PCR方法,并通過(guò)已建立的方法對(duì)收集的呼吸道病犬病料進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,所建立的三重PCR體系組成為2×Taq Mix 12.5μL,3對(duì)上、下游引物各0.6μL,混合模板1μL,ddH₂O 7.9μL;擴(kuò)增程序?yàn)?4℃5 min;94℃30 s,54℃1 min,72℃24 s,共35個(gè)循環(huán);72℃8 min。該方法具有較高的靈敏性和特異性。臨床驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明,本實(shí)驗(yàn)所建立的多重PCR方法可用于臨床診斷。 

【文章來(lái)源】：上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2020,(06)

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【部分圖文】：

三重PCR的檢測(cè)結(jié)果

單個(gè)病毒的PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:CPV的PCR檢測(cè)(圖1),46～54 ℃均能獲得清晰的條帶;CDV的PCR檢測(cè)(圖2),52、54 ℃能獲得清晰的條帶;CRCoV的PCR檢測(cè)(圖3),54 ℃能顯示出清晰的條帶。綜合3個(gè)單病毒擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果,選擇54 ℃為多重PCR退火溫度。圖2 不同退火溫度的CDV PCR檢測(cè)結(jié)果

不同退火溫度的CDV PCR檢測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3014582