近年來,隨著人類活動(dòng)范圍增大以及過度的砍伐森林和非法獵殺野生動(dòng)物,野生動(dòng)物棲息地遭到破壞,種群數(shù)量減少。保護(hù)野生動(dòng)物種群的生存和繁衍,改善野生動(dòng)物生存環(huán)境迫在眉睫。因此,國(guó)內(nèi)外越來越多的科研人開始關(guān)注和研究野生動(dòng)物。但是對(duì)野生動(dòng)物腸道微生物的研究相對(duì)較少,大部分研究依然使用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法進(jìn)行,結(jié)果不夠全面準(zhǔn)確。高通量測(cè)序技術(shù)因經(jīng)濟(jì)快捷、準(zhǔn)確性好、靈敏度高和通量高而被廣泛用于對(duì)人和動(dòng)物腸道微生物研究。該技術(shù)能夠較全面準(zhǔn)確的展示腸道微生物整體環(huán)境。而提取高質(zhì)量腸道微生物的總DNA又是利用高通量測(cè)序技術(shù)研究腸道微生物的前提。提取的總DNA質(zhì)量好壞將影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果精確性和準(zhǔn)確性,但現(xiàn)今沒有統(tǒng)一的提取標(biāo)準(zhǔn),不同方法提取腸道微生物總DNA的質(zhì)量存在巨大的差異。因此,找到合適的提取腸道微生物總DNA的方法尤為重要。本研究具體內(nèi)容如下:1、野生動(dòng)物糞便DNA提取方法對(duì)比研究本研究選取6種提取方法與2種提取策略組合,同時(shí)提取草食性和肉食性野生動(dòng)物糞便總DNA。結(jié)果表明,方法1直接提取肉食性野生動(dòng)物糞便微生物總DNA和方法3預(yù)處理提取的草食性野生動(dòng)物糞便微生物總DNA質(zhì)量較高,能較好反映糞便的微生多樣性。... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

種方法提取4組糞便樣品總DNA圖

分析儀下觀察（圖 2.2）。從圖中可以看出，CP1-HN1都有明顯的特異性條帶，只有HN1有輕微拖帶；HP2、HN2有明顯的特異性條帶，但同時(shí)存在拖帶情況；CP2、CN2沒有明顯特異性條帶且降解較為嚴(yán)重；CP3沒有明顯的特異性條帶，HP3-CN3都有特異性條帶，但 CN3、HN3有嚴(yán)重的降解和拖帶；CP4-CN4沒有特異性條帶，HN4有輕微的特異性條帶，4 組都沒有明顯降解和拖帶；CP5-HN5都有特異性條帶，但都伴隨著嚴(yán)重的拖帶和降解；CP6-HN6沒有明顯條帶，且降解嚴(yán)重，以上所有特異性條帶大小都為23kb 左右。綜上我們可知對(duì)于肉食動(dòng)物糞便方法 1 較其他的方法提取效果好；對(duì)草食動(dòng)物糞便方法 3 預(yù)處理提取和方法 1 較其他方法效果好。

合酶活性導(dǎo)致無法進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，這與目測(cè)總 DNA 溶液顏色及透明度結(jié)果除方法 5 外，方法 1-4 提取 HP組（預(yù)處理草食動(dòng)物組）總 DNA 擴(kuò)增產(chǎn)物有異性條帶，條帶大小為 1500bp 與擴(kuò)增目的條帶大小相符，這說明在提取食便動(dòng)物糞便時(shí)適當(dāng)?shù)念A(yù)處理能夠減少總 DNA 中抑制 PCR 聚合酶活性的物知提取草食動(dòng)物糞便總 DNA 時(shí)，方法 1-4 加上預(yù)處理提取效果較好，其他。食肉動(dòng)物糞便組（CP、CN）提取時(shí)，方法 6 提取重復(fù)性較差；而方法 3 提肉食動(dòng)物未處理糞便組）重復(fù)性差，提取 CP（肉食動(dòng)物預(yù)處理糞便組）有性條帶；方法 1、2、4、5 提取肉食動(dòng)物糞便總 DNA 都能擴(kuò)增出特異性條 1、2 提取 CP（肉食動(dòng)物預(yù)處理糞便組）的總 DNA 擴(kuò)增條帶亮度比提取 CN（未處理糞便組）總 DNA 擴(kuò)增條帶高。方法 4、5 提取肉食動(dòng)物糞便組不受影響，都能擴(kuò)增出較亮的條帶。因此可知，方法 4、5 和方法 1、2 加上預(yù)處食動(dòng)物糞便效果最好，方法 1、2 直接提取肉食動(dòng)物糞便效果次之，其他方

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]基于16S rRNA基因的喜馬拉雅塔爾羊、巖羊和歐洲盤羊的腸道微生態(tài)研究[D]. 孫國(guó)雷.曲阜師范大學(xué) 2017
[2]基于16S rDNA的豺、狼、家犬腸道微生態(tài)研究[D]. 吳曉陽.曲阜師范大學(xué) 2016
[3]雪豹腸道菌群多樣性研究[D]. 劉廣帥.曲阜師范大學(xué) 2013
[4]人工飼養(yǎng)條件下虎腸道菌群結(jié)構(gòu)研究[D]. 田銀平.東北林業(yè)大學(xué) 2013
[5]PCR-DGGE對(duì)六種淡水魚類腸道菌群結(jié)構(gòu)的比較研究[D]. 許振國(guó).曲阜師范大學(xué) 2009
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本文編號(hào)：3014515