豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種豬的急性高度接觸性傳染病。目前主要依靠接種疫苗來(lái)對(duì)該病進(jìn)行預(yù)防，尚無(wú)有效的治療藥物。且近年來(lái)，變異的PRRSV毒株不斷出現(xiàn)，給PRRS的預(yù)防和治療帶來(lái)了更大的困難。因此，對(duì)PRRSV變異情況的實(shí)地實(shí)時(shí)監(jiān)控及找到有效治療藥物成為防治PRRS的重中之重。本研究收集河南省部分地區(qū)的82份陽(yáng)性PRRS病料，應(yīng)用RT-PCR方法分別擴(kuò)增其PRRSV的ORF5全基因和Nsp2部分基因，進(jìn)行測(cè)序比對(duì)分析，尋找PRRSV毒株的變異特點(diǎn)。結(jié)果表明：82份陽(yáng)性病料的ORF5基因核酸序列間同源性為94.2%～100%；與美洲型株VR-2332、國(guó)內(nèi)變異株JXA1及歐洲型株LV的同源性分別為86.9%～89.7%，95.7%～99.7%及60.8%～66.3%。所擴(kuò)增的Nsp2基因與VR-2332的相比均存在著兩個(gè)位點(diǎn)、90個(gè)堿基的缺失，提示河南省新近流行毒株基本均為高致病性PRRSV。本研究對(duì)河南地區(qū)新近流行的PRRSV毒株的ORF5和Nsp2基因的變異情況進(jìn)行了調(diào)查監(jiān)測(cè)，為PRRS區(qū)域性防控措施的制定與實(shí)施提供了理論基礎(chǔ)。為科... 

【文章來(lái)源】：河南科技大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PRRSV病毒粒子結(jié)構(gòu)模式圖

PRRSV 基因組全長(zhǎng)約 15 kb，核酸 5′端有帽子狀類(lèi)似物，3′端有 Poly序列，基因組含有 9 個(gè)開(kāi)放閱讀框 (ORFs)（如圖 1-2）。其中 ORF1 有分組成，分別是 ORF1a 和 ORF1b ，位于 PRRSV 基因組 5′端非編碼前之后，其長(zhǎng)度約為整個(gè)基因組長(zhǎng)度的 80%，為病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)病毒的 RNA 復(fù)制酶和聚合酶[11-13]。ORF1 上游是 5′端非編碼區(qū)（UTORF2、ORF3、ORF4 和 ORF5 翻譯的分別是糖基化囊膜蛋白 GP2、PG3和 GP5，此外，ORF6 翻譯非糖基化囊膜蛋白（M）、ORF7 翻譯核衣殼（N）[12-14]。其中 PRRSV 主要的結(jié)構(gòu)蛋白有 ORF5 翻譯的 GP5、ORF6 M 和 ORF7 翻譯的 N 蛋白。它們都具有很強(qiáng)的免疫原性，對(duì) PRRSV 的診重要意義[15]。圖 1-1 PRRSV 病毒粒子結(jié)構(gòu)模式圖Fig.1-1 The virion constructual mode of PRRSV

Reaction reagentReaction volume10× Buffer 2.0μLDNA 10.0μLEcoR I 1.0μLHind III1.0μLddH2O 6.0μL2.3 結(jié)果與分析2.3.1 ORF5 基因的擴(kuò)增結(jié)果對(duì)采集的疑似 PRRS 病料進(jìn)行 ORF5 基因的 RT-PCR 擴(kuò)增，結(jié)果顯示，有82 份病料為陽(yáng)性樣品，依次編號(hào)為 YD-1 至 YD-19、YN-1 至 YN-21、YX-1 至YX-23、YB-1 至 YB-19。1% 瓊脂凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果與預(yù)期目的片段大小相符，部分樣品電泳結(jié)果如圖 2-1。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3013476