豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae, APP）引起的一種高度傳染性呼吸道疾病,給世界各地的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。APP通過飛沫傳播或感染動物接觸傳播,定植于豬下呼吸道表皮細(xì)胞。APP血清型眾多,根據(jù)表面多糖抗原性差異可將該病原分為15個血清型。胸膜肺炎放線桿菌在不同國家和地區(qū)的流行情況具有一定差異,我國已分離到APP血清1、2、3、4、5、7和8型菌株,其中以7型最多,其次為1型、2型和3型。APP致病過程涉及眾多毒力因子,目前圍繞其致病機(jī)制開展了大量研究工作,然而APP早期定植感染的致病機(jī)理尚不明確。Ⅳ型菌毛在多種病原菌致病過程中發(fā)揮重要作用,其中包括介導(dǎo)粘附定植、突破免疫屏障、影響生物被膜形成、顫搐運(yùn)動、DNA攝取等。為了更好地控制和預(yù)防APP導(dǎo)致的疾病,研究APP致病機(jī)理,尤其是APP早期粘附定植的作用機(jī)制具有重要意義。本課題對APPⅣ型菌毛的功能和在致病過程發(fā)揮的作用進(jìn)行探討,并對Ⅳ型菌毛結(jié)構(gòu)蛋白白ApfA的免疫原性與免疫保護(hù)力進(jìn)行了研究。1.胸膜肺炎放線桿菌Ⅳ型菌毛介導(dǎo)粘附和定植粘附是細(xì)菌建立感染的第一步... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表（ABBREVIATION）
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌的概述
        1.1.1 病原學(xué)與流行病學(xué)
        1.1.2 臨床癥狀和病理變化
        1.1.3 診斷與防治
    1.2 胸膜肺炎放線桿菌毒力因子
        1.2.1 粘附定植
        1.2.2 營養(yǎng)攝取
        1.2.3 機(jī)體損傷
        1.2.4 抵抗宿主免疫防御
        1.2.5 持續(xù)感染
    1.3 胸膜肺炎放線桿菌疫苗的研究進(jìn)展
        1.3.1 滅活疫苗
        1.3.2 亞單位疫苗
        1.3.3 核酸疫苗
        1.3.4 菌影疫苗
        1.3.5 口服疫苗
        1.3.6 弱毒活疫苗
    1.4 細(xì)菌Ⅳ型菌毛研究進(jìn)展
        1.4.1 Ⅳ型菌毛結(jié)構(gòu)與組裝
        1.4.2 Ⅳ型菌毛功能
2 胸膜肺炎放線桿菌Ⅳ型菌毛結(jié)構(gòu)蛋白APFA功能研究
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 菌株、質(zhì)粒、細(xì)胞及培養(yǎng)條件
        2.2.2 主要試劑及藥品
        2.2.3 培養(yǎng)基及抗生素配制
        2.2.4 主要溶液的配制
        2.2.5 引物
        2.2.6 實(shí)驗(yàn)動物
        2.2.7 apfA基因缺失突變株及互補(bǔ)菌株的構(gòu)建和篩選
        2.2.8 蛋白表達(dá)及純化
        2.2.9 小鼠多克隆抗體制備
        2.2.10 細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        2.2.12 RNA提取及熒光定量PCR
        2.2.13 Western Blot
        2.2.14 小鼠肺部定植實(shí)驗(yàn)
        2.2.15 小鼠毒力實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 生物被膜檢測
        2.2.17 細(xì)胞毒性檢測
        2.2.18 溶血實(shí)驗(yàn)
        2.2.19 CD46分子表達(dá)檢測
        2.2.20 酵母雙雜交
        2.2.21 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 APP apfA基因缺失突變株、及互補(bǔ)菌株的構(gòu)建
        2.3.2 ApfA重組蛋白表達(dá)純化
        2.3.3 APP Ⅳ型菌毛基因簇細(xì)胞接觸表達(dá)檢測
        2.3.4 ApfA對APP細(xì)胞粘附能力的影響
        2.3.5 ApfA對APP小鼠定植能力及毒力的影響
        2.3.6 ApfA對APP生物被膜形成能力的影響
        2.3.7 ApfA對APP溶血活性、細(xì)胞毒性的影響
        2.3.8 CD46分子粘附受體驗(yàn)證
        2.3.9 Ⅳ型菌毛宿主互作蛋白篩選
    2.4 討論
        2.4.1 Ⅳ型菌毛與粘附定植
        2.4.2 Ⅳ型菌毛其他功能
        2.4.3 Ⅳ型菌毛受體尋找
3 胸膜肺炎放線桿菌Ⅳ型菌毛結(jié)構(gòu)蛋白APFA免疫原性分析
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 主要試劑及藥品
        3.2.2 主要溶液的配制
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)動物
        3.2.4 抗體效價檢測
        3.2.5 抗體分型
        3.2.6 小鼠主動免疫實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 小鼠被動免疫試驗(yàn)
        3.2.8 生物信息學(xué)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 ApfA保守型分析
        3.3.2 ApfA抗體效價檢測
        3.3.3 ApfA體內(nèi)表達(dá)檢測
        3.3.4 ApfA多克隆抗體檢測分型
        3.3.5 ApfA小鼠免疫保護(hù)力分析
        3.3.6 ApfA小鼠被動免疫保護(hù)力分析
    3.4 討論
        3.4.1 APP Ⅳ型菌毛基因的分布與保守性
        3.4.2 ApfA與保護(hù)性抗原
        3.4.3 ApfA開發(fā)成亞單位疫苗的潛力
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]豬胸膜肺炎放線桿菌apxⅡ基因工程突變株構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究[D]. 貝為成.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]與豬鏈球菌2型SntA蛋白互作的豬腦組織蛋白質(zhì)的鑒定[D]. 萬云.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3010316