發(fā)布時(shí)間：2021-01-30 14:04

　　無論是對(duì)于哺乳羔羊,還是以羊奶粉為營養(yǎng)的人類而言,山羊酪蛋白都是最關(guān)鍵的營養(yǎng)成分。另外,羊乳酪蛋白合成和分泌的水平,也是反映山羊乳腺上皮細(xì)胞生理功能狀態(tài)的重要指標(biāo)之一。因而,測定山羊酪蛋白,不僅對(duì)于準(zhǔn)確評(píng)估山羊乳汁干物質(zhì)含量、確定羊奶加工產(chǎn)品質(zhì)量,而且對(duì)評(píng)估山羊乳腺生理狀態(tài)、乳腺上皮細(xì)胞的鑒定和功能鑒定等都具有極其重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。以單克隆抗體為工具建立的蛋白質(zhì)定性和定量測定技術(shù)是蛋白質(zhì)測定中最常用、最普遍、最科學(xué)的技術(shù),但這一技術(shù)的前提條件是必須研制出檢測靶蛋白的單克隆抗體。本研究以山羊乳為材料,采用蛋白質(zhì)分離技術(shù)對(duì)羊乳酪蛋白進(jìn)行了分離,以純化的酪蛋白為抗原,免疫6周齡BALB/c小鼠,建立酪蛋白抗體的ELISA測定技術(shù),測定免疫小鼠的酪蛋白抗體效價(jià),采用常規(guī)的單克隆抗體制備技術(shù),用免疫小鼠脾細(xì)胞和SP2/0細(xì)胞制備篩選出分泌抗酪蛋白單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞,并對(duì)單克隆抗體按照常規(guī)要求指標(biāo)進(jìn)行鑒定,最后初步探討研制的αs1酪蛋白單克隆抗體在一些檢測技術(shù)中應(yīng)用的可行性。研究獲得如下結(jié)果:1.獲得了純化的山羊酪蛋白和相應(yīng)的免疫血清。2.山羊酪蛋白優(yōu)化包被濃度為10μg/mL,包被時(shí)... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

山羊酪蛋白的SDS-PAGE分析

圖 3-1 雜交瘤 5B 單克隆化后分裂增殖結(jié)果(40×)Figure 3-1 The proliferation of hybrodoma 5B (40×)抗體效價(jià)測定結(jié)果測定 5B 細(xì)胞株上清、未純化腹水的效價(jià)，OD450值如表 3為 1:28，未純化腹水效價(jià)為 1:105。胞株連續(xù)傳代并凍存復(fù)蘇 4 次，ELISA 方法測定上清抗體代數(shù) OD450值均在 1.5 左右， 凍存復(fù)蘇后 OD450值均在 1表 3-2 5B 細(xì)胞培養(yǎng)上清和腹水效價(jià)檢測結(jié)果Table 3-2 Testing results of 5B culture supernatant and ascites titers胞株ll strain上清和腹水效價(jià)Titers of supernatant and ascites細(xì)胞培養(yǎng)上清Culture supernatant未純化Un-pur5B 1:281表 3-3 細(xì)胞連續(xù)傳代的培養(yǎng)上清 OD450值

表 3-4 雜交瘤細(xì)胞反復(fù)凍存復(fù)蘇培養(yǎng)上清 OD450 值 3-4 OD450values of hybridoma culture supernatant after freez凍存復(fù)蘇次數(shù)The times of freeze-thaw1 2 3 1.521±0.012 1.482±0.025 1.503±0.009 胞染色體組型分析結(jié)果細(xì)胞核內(nèi)的全部染色體的形態(tài)特征分析，利用染色常遺傳(鄧傳良 et al. 2012)。BALB/c 鼠脾細(xì)胞染數(shù)目是 62-68 條，雜交瘤染色體數(shù)目接近母本細(xì)如圖 3-2，新形成的細(xì)胞株 5B 染色體數(shù)量是 98 條

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]羊乳制品中牛乳源成分的鑒別檢測技術(shù)[J]. 宋蓓,宋桂雪,宋薇.  食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報(bào). 2016(06)
[2]一種從羊奶中檢測牛奶和大豆成分多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立[J]. 范陽陽,張犖嘉,劉艷艷,卞如如,霍勝楠,張卉,張全芳,步迅.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(06)
[3]采用電子鼻檢測羊奶中的牛奶摻入[J]. 金嫘,白麗娟,彭小雨,于情情.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2015(04)
[4]羊乳中牛乳成分快速檢測方法的建立[J]. 趙芳,張歡.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(32)
[5]電子鼻對(duì)羊奶中三種抗生素殘留的快速檢測[J]. 王妍穩(wěn),張瑤,丁武.  食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào). 2013(04)
[6]不同哺乳動(dòng)物乳中主要營養(yǎng)成分比較的研究進(jìn)展[J]. 李龍柱,張富新,賈潤芳,晏慧莉,陳雪.  食品工業(yè)科技. 2012(19)
[7]基于fisher線性判別和BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的電子鼻羊奶貯藏時(shí)間預(yù)測[J]. 張虹艷,丁武.  中國食品學(xué)報(bào). 2012(06)
[8]利用電子鼻區(qū)分羊奶中不同濃度抗生素[J]. 張瑤,丁武.  食品與機(jī)械. 2011(06)
[9]以羊奶和牛奶為原料的新鮮干酪風(fēng)味的對(duì)比研究[J]. 甄貞,許曉曦,滕國新,鄧群,駱承庠.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(06)
[10]山羊奶營養(yǎng)及加工工藝特性[J]. 陳建明,馮建忠,張居農(nóng).  中國奶牛. 2009(04)

碩士論文
[1]羊乳中牛乳摻假的膠體金免疫層析試紙條檢測研究[D]. 王帥星.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]電子鼻對(duì)羊奶及羊奶粉摻假的快速檢測研究[D]. 馬利杰.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[3]電子鼻對(duì)羊奶中三種抗生素快速檢測的研究[D]. 張瑤.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3009030