近年來,干細(xì)胞治療在相關(guān)疾病中已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段,但免疫排斥現(xiàn)象如影隨從,是干細(xì)胞治療技術(shù)的絆腳石。半乳糖凝集素1（Galectin-1,GAL-1）在大多數(shù)間充質(zhì)干細(xì)胞、多數(shù)腫瘤及鹿茸干細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)高表達(dá),而相應(yīng)的這些細(xì)胞中均出現(xiàn)免疫抑制現(xiàn)象。GAL-1作為免疫調(diào)控因子,推測(cè)其很可能參與了干細(xì)胞的免疫調(diào)控。鹿茸是唯一能夠在失去后還能完全再生的哺乳動(dòng)物器官。研究表明,鹿茸再生是一個(gè)基于干細(xì)胞的過程,鹿茸干細(xì)胞中高表達(dá)GAL-1基因,推測(cè)其是鹿茸再生中的一個(gè)重要調(diào)控因子。為研究GAL-1在鹿茸干細(xì)胞中的表達(dá)及可能的生物學(xué)功能,本論文以東北梅花鹿鹿茸的干細(xì)胞組織,即生茸區(qū)骨膜和角柄骨膜（致敏角柄骨膜與休眠角柄骨膜）以及對(duì)照組織面部骨膜為研究材料,克隆了梅花鹿的GAL-1基因CDS區(qū)序列,利用軟件或網(wǎng)站,對(duì)GAL-1蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析;利于Western-blot及Q-PCR技術(shù)檢測(cè)了GAL-1在鹿茸干細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示:梅花鹿GAL-1 ORF全長(zhǎng)為408bp,編碼134個(gè)氨基酸;相對(duì)分子質(zhì)量為14.69KDa,氨基酸序列與牛羊高度接近（95%>）;主要定位于細(xì)胞外,... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

GAL-1目的片段RT-PCR結(jié)果

圖2 GAL-1基因開放閱讀框及其核酸、氨基酸序列Fig 2 Open reading frame and the sequences of nucleotides and amino acids of GAL-12.2.2 梅花鹿 GAL-1 CDS 區(qū)相似度對(duì)比與發(fā)育樹分析將牛、人、綿羊、大鼠、小鼠、野豬、犬科、獼猴、大鯢、條石鯛、灰蓋鬼傘菌的GAL-1核苷酸與氨基酸序列導(dǎo)入DNAman，與梅花鹿GAL-1序列對(duì)比發(fā)現(xiàn)相似度分別為：34.58％~95.59％，17.88％~97.06％，。與同屬的反芻類動(dòng)物相似度最高，與哺乳動(dòng)物相似度接近，與大鯢、條石鯛、灰蓋鬼傘菌的相似度逐漸降低，這符合進(jìn)化規(guī)律。表 2 梅花鹿GAL-1核苷酸與氨基酸序列與其他動(dòng)物的一致性分析Table 2 Comparisons of nucleotides and amino acids of sika deer with those from other organisms物種Species核苷酸一致性/％Nucleotides identity氨基酸一致性/％Amino acid identity牛 Bos taurus綿羊 Ovis aries獼猴 Macaca mulatta95.5995.1388.7395.3097.0689.63

圖 3 GAL-1 基因編碼區(qū)的系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 3 Phylogenetic tree for GAL-1 gene coding region2.2.3 Gal 基因編碼的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析2.2.3.1 理化性質(zhì)GAL-1基因編碼蛋白是一個(gè)約為14Kda的小分子蛋白，在幾乎所有真核生物中均有表達(dá)，進(jìn)化比較保守。ProtParam（http://web.expasy.org/protparam/）分析顯示：GAL-1分子量為14.69Kd等電點(diǎn)（PI）為5.10。GAL-1蛋白的組成包含20種氨基酸，丙氨酸（Ala）占比最高（11.1％），色氨酸（Trp）與蛋氨酸（Met）占比最低（均為0.7％）。Protscale（http://web.expasy.org/protscale分析蛋白親疏水性顯示GAL-1蛋白僅在1-20和80-100存在兩個(gè)疏水性較高的區(qū)域，其它區(qū)域趨向于親水；ProtParam中親水性的平均值（GRAVY）-0.145<0；利用TMHMM Server v.2.0網(wǎng)站對(duì)GAL蛋白進(jìn)行跨膜分析（http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/），顯示GAL-1蛋白沒有跨膜結(jié)構(gòu)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]臍帶間充質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)修復(fù)的作用[J]. 高文勇,陳琳,黃紅云.  解剖科學(xué)進(jìn)展. 2017(05)
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[3]利用qRT-PCR技術(shù)篩選鹿茸生長(zhǎng)中心細(xì)胞與鹿茸干細(xì)胞內(nèi)參基因[J]. 張偉,劉佳,董振,李春義.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2017(05)
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碩士論文
[1]Galectin-1在滋養(yǎng)層干細(xì)胞增殖和分化中的表達(dá)與相關(guān)調(diào)控分子的研究[D]. 尤佳莉.浙江大學(xué) 2015
[2]梅花鹿生茸區(qū)骨膜干細(xì)胞Galectin-1基因RNAi重組慢病毒載體的構(gòu)建[D]. 秦欣欣.江蘇科技大學(xué) 2013
[3]Galectin-1的表達(dá)純化及其抑瘤功能的初步研究[D]. 任聲權(quán).中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2008



本文編號(hào)：3007620