秋水仙堿是從歐洲百合科植物秋水仙的球莖中分離出的一種卓酚酮類生物堿。因其特殊的結構和強抗癌活性,近幾年有關秋水仙堿作用機制的研究異�；钴S。臨床上常作為痛風性關節(jié)炎急性發(fā)作和某些癌癥治療的首選藥。除此之外,秋水仙堿還廣泛應用于抗炎、抗纖維化及免疫調節(jié)等方面。因其治療量和中毒量比較接近,毒副作用較大,所以因誤食含秋水仙堿的食物或因治療劑量與中毒劑量掌握不準、交代不清藥物的用法用量等原因導致臨床上中毒或致死的現(xiàn)象很多。因此有必要對秋水仙堿藥物殘留進行檢測方法的研究。酶聯(lián)免疫分析技術（ELISA）具有前處理簡單、特異性高、分析成本低等特點,以其固有的優(yōu)勢在藥物殘留分析中顯示出遠大的應用前景。因此本研究選擇建立秋水仙堿藥物的ELISA檢測方法,為秋水仙堿藥物的殘留檢測提供了分析方法。本研究采用硫酸水解反應成功地改造了秋水仙堿的分子結構,使其具有活性基團,并采用碳二亞胺（EDC）法和戊二醛（GA）法偶聯(lián)載體蛋白,成功制備了秋水仙堿的包被原和免疫原。通過對包被原的篩選,選出三甲基-COL-GA-OVA作為包被原以提高檢測方法的靈敏度。通過對抗血清的抑制檢測篩選,選出三甲基-COL-EDC-BSA作為... 

【文章來源】：福建農林大學福建省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 秋水仙堿文獻綜述
    1 秋水仙堿的概述
    2 秋水仙堿臨床應用
        2.1 治療痛風性關節(jié)炎
        2.2 抗腫瘤活性
        2.3 治療病毒性肝炎及肝硬化
        2.4 預防心血管疾病
        2.5 治療皮膚病
        2.6 抗纖維化及組織增生
        2.7 其他臨床應用
        2.8 不良反應
    3 秋水仙堿在農業(yè)及中藥育種中的應用
    4 秋水仙堿檢測方法的研究現(xiàn)狀
        4.1 免疫學分析法
        4.2 分光光度法
        4.3 電化學方法
        4.4 流動注射化學發(fā)光法
        4.5 流式細胞儀法
        4.6 薄層色譜法
        4.7 磁共振成像法
        4.8 高效液相色譜法（HPLC）
        4.9 高效液相色譜-質譜聯(lián)用及其他檢測方法
    5 研究目的和意義
    6 研究內容
第二章 秋水仙堿多克隆抗體的制備
    1 實驗材料
        1.1 試劑和藥品
        1.2 儀器與設備
        1.3 溶液系統(tǒng)
        1.4 實驗動物
    2 試驗方法
        2.1 透析袋的預處理
        2.2 秋水仙堿人工抗原的合成
        2.3 動物免疫
        2.4 制備血清
        2.5 抗血清的篩選
        2.6 抗血清效價的測定
        2.7 交叉反應的測定
    3 結果與分析
        3.1 半抗原高效液相色譜-質譜圖分析
        3.2 免疫原和包被原的鑒定
        3.3 抗血清的篩選
        3.4 抗血清效價的測定
        3.5 交叉反應的測定
    4 討論
        4.1 人工抗原的合成
        4.2 抗體的制備和抗血清的篩選
    5 小結
第三章 秋水仙堿ELISA檢測方法的建立
    1 實驗材料
        1.1 試劑和藥品
        1.2 儀器與設備
        1.3 溶液系統(tǒng)
    2 間接競爭ELISA方法條件的優(yōu)化
        2.1 確定最佳包被濃度和多抗的最佳工作濃度
        2.2 確定最佳包被液
        2.3 確定最佳包被條件
        2.4 確定最佳封閉液
        2.5 確定最佳封閉時間
        2.6 確定競爭反應的最佳反應時間
        2.7 確定酶標二抗的最佳反應濃度
        2.8 最佳反應緩沖液pH的確定
        2.9 最佳反應緩沖液中鹽離子濃度的確定
        2.10 建立標準曲線
    3 雞肉樣品的添加回收試驗
        3.1 樣品前處理
        3.2 檢測限的確定
        3.3 添加回收率的測定
        3.4 方法的驗證
    4 結果與分析
        4.1 間接競爭ELISA方法的優(yōu)化
        4.2 雞肉樣品的添加回收試驗
    5 討論
    6 小結
第四章 總結
    1 結論
    2 展望
參考文獻
縮略詞
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]秋水仙堿慢性中毒致肌病1例分析[J]. 吳家順,周婧.  湖北中醫(yī)雜志. 2013(12)
[2]加味四妙散聯(lián)合秋水仙堿治療急性痛風性關節(jié)炎的觀察[J]. 黃潯芳,姬森國,張徐明,劉炬,胡玲.  江西醫(yī)藥. 2013(10)
[3]低劑量秋水仙堿聯(lián)合雙氯芬酸鈉治療痛風急性發(fā)作療效觀察[J]. 李育紅,張清安,萬文軍.  藥物流行病學雜志. 2013(09)
[4]秋水仙堿聯(lián)合消炎痛栓治療痛風性關節(jié)炎的效果研究[J]. 鄧日遠.  中國醫(yī)學創(chuàng)新. 2013(17)
[5]秋水仙堿離體誘導半枝蓮多倍體的研究[J]. 趙曉潘,瞿大樅,陳崇順.  江蘇農業(yè)科學. 2013(03)
[6]秋水仙堿致橫紋肌溶解綜合征合并急性腎衰竭1例[J]. 梁瑩,王妍春.  實用醫(yī)學雜志. 2013(06)
[7]服用秋水仙堿導致脊髓亞聯(lián)合變性1例報告[J]. 胡昊,周鴻飛.  吉林醫(yī)學. 2013(08)
[8]秋水仙堿誘導亞麻四倍體的技術研究[J]. 郭永霞,王麗艷,孫強,潘翠翠,殷奎德.  激光生物學報. 2013(01)
[9]純天然食物與人類健康安全[J]. 樓秀余.  科技傳播. 2013(01)
[10]秋水仙堿體外抗乙型肝炎病毒的作用[J]. 孔維涵,方步武,朱爭艷,高英堂,丁賢,杜智.  中國醫(yī)院藥學雜志. 2012(24)

博士論文
[1]六味痛風飲防治痛風性關節(jié)炎作用機理的實驗研究[D]. 趙恒立.山東中醫(yī)藥大學 2009
[2]秋水仙堿口服緩控釋劑型研究[D]. 王文蘋.成都中醫(yī)藥大學 2008

碩士論文
[1]痛風寧顆粒對雞痛風模型血清黃嘌呤氧化酶活性和腎功能的影響[D]. 賴震.福建中醫(yī)學院 2005



本文編號：3007202