犢牛大腸桿菌性腹瀉是由產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌引起的一種消化道傳染病,表現(xiàn)為劇烈腹瀉、脫水甚至死亡,給養(yǎng)牛業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。臨床上抗生素的不規(guī)則使用,加劇了細(xì)菌的耐藥性,耐藥菌株不斷增多,耐藥譜越來越廣。目前該病主要采用不同地區(qū)大腸桿菌優(yōu)勢(shì)毒力因子制成的多價(jià)疫苗和敏感藥物進(jìn)行防治。因此,開展?fàn)倥８篂a大腸桿菌的毒力基因和耐藥性調(diào)查,對(duì)防治大腸桿菌性犢牛腹瀉具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究?jī)?nèi)容包括大腸桿菌腸毒素基因多重PCR方法的建立、毒力基因檢測(cè)和耐藥性調(diào)查3個(gè)方面。多重PCR檢測(cè)方法的建立。本研究參照文獻(xiàn)合成4對(duì)擴(kuò)增大腸桿菌estA （229bp）、estB （480bp）、elt-Ⅰ（605bp）和elt-Ⅱ（300bp）基因片段的特異性引物,通過對(duì)反應(yīng)條件的優(yōu)化、敏感性和特異性試驗(yàn)及臨床樣品檢測(cè),建立了檢測(cè)大腸桿菌腸毒素基因的多重PCR方法。該方法穩(wěn)定、特異、敏感,最低檢出量分別為2.55×101CFU/μL、2×101CFU/μL和2.47×103CFU/μL。毒力基因的檢測(cè)。從黑龍江省哈爾濱市、阿城、牡丹江、北安、肇東、克東等地區(qū)12個(gè)奶牛場(chǎng)共采集131份犢牛腹瀉糞便樣本,共分離到34... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 致病性大腸桿菌
        1.1.1 生物學(xué)分類地位及結(jié)構(gòu)
        1.1.2 理化特性和血清型
        1.1.3 毒力因子及致病機(jī)理
        1.1.4 檢測(cè)方法
        1.1.5 大腸桿菌耐藥性
    1.2 犢牛大腸桿菌病
        1.2.1 病原
        1.2.2 流行病學(xué)
        1.2.3 臨診癥狀及病理變化
        1.2.4 診斷與防治
    1.3 研究的目的與意義
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株、犢牛腹瀉糞便樣品
        2.1.2 PCR擴(kuò)增引物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大腸桿菌腸毒素基因多重PCR方法的建立
        2.2.2 犢牛腹瀉糞便中大腸桿菌的分離鑒定及毒力基因檢測(cè)
        2.2.3 大腸桿菌分離株的耐藥性檢測(cè)
3 結(jié)果與分析
    3.1 大腸桿菌腸毒素基因多重PCR檢測(cè)方法的建立
        3.1.1 estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ全長(zhǎng)基因克隆
        3.1.2 重組克隆質(zhì)粒的PCR驗(yàn)證及序列分析
        3.1.3 多重PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.1.4 多重PCR特異性
        3.1.5 多重PCR敏感性
        3.1.6 大腸桿菌臨床樣本的多重PCR檢測(cè)
        3.1.7 試劑盒的組裝
    3.2 犢牛腹瀉糞便中大腸桿菌的分離鑒定及毒力基因檢測(cè)
        3.2.1 大腸桿菌的分離培養(yǎng)
        3.2.2 革蘭氏染色鏡檢
        3.2.3 生化鑒定
        3.2.4 毒力基因檢測(cè)
    3.3 耐藥性檢測(cè)
        3.3.1 大腸桿菌耐藥性分析
        3.3.2 大腸桿菌多重耐藥情況
4 討論
    4.1 多重PCR技術(shù)
    4.2 大腸桿菌毒力基因
    4.3 大腸桿菌耐藥性
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]畜牧養(yǎng)殖中細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生機(jī)制與對(duì)策[J]. 王帥兵,熊良偉,陳曉蘭.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(06)
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[8]犢牛大腸桿菌病的防治[J]. 李志強(qiáng),胡唐雁.  中國(guó)牛業(yè)科學(xué). 2009(02)
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博士論文
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碩士論文
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[2]大腸桿菌O157的分子流行病學(xué)調(diào)查和毒力因子研究[D]. 張書蕭.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]大腸桿菌不耐熱腸毒素突變蛋白的表達(dá)及其對(duì)粘膜免疫效果的影響[D]. 黃佳佳.揚(yáng)州大學(xué) 2012
[4]德州地區(qū)雞源致病性大腸桿菌流行病學(xué)調(diào)查與耐藥性分析[D]. 藺慧.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[5]牛源大腸桿菌耐藥性及耐藥機(jī)制研究[D]. 王宏.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[6]犢牛腹瀉主要病原菌毒力基因檢測(cè)及其重組表達(dá)[D]. 高立戰(zhàn).中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2010
[7]陜西省犢牛大腸桿菌性腹瀉的流行病學(xué)調(diào)查及初步免疫試驗(yàn)[D]. 高睿.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008
[8]重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157的流行病學(xué)調(diào)查[D]. 丁紅雷.西南大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3005767