布魯菌Omp19基因的原核表達及其抗體的制備
發(fā)布時間：2021-01-26 17:08
布魯菌病是由布魯菌引起的一種人畜共患傳染病，給人類的生命健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)發(fā)展造成極大的危害，是目前世界上最嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。布魯菌外膜蛋白高度保守，且具有免疫原性和免疫保護作用，對布魯菌病的防控具有重大意義。本研究以布魯菌Omp19基因為對象，對其進行原核表達并制備單克隆抗體，以期為該病的發(fā)病機制和檢測研究奠定基礎(chǔ)。根據(jù)GenBank上發(fā)表的布魯菌外膜蛋白Omp19的基因序列設(shè)計引物，以布魯菌基因組DNA為模板，克隆了Omp19基因，將目的基因與表達載體pET-32a連接，構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒pET32a-Omp19，將重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細胞BL21，誘導(dǎo)表達出了布魯菌外膜蛋白Omp19，通過鎳柱親和層析方法對其進行了純化，將純化的目的蛋白免疫Balb/c小鼠，當(dāng)效價達到一定水平后，取其脾細胞與骨髓瘤細胞以一定的比例融合，用ELISA方法進行篩選以能分泌抗Omp19單克隆抗體的雜交瘤細胞。本研究結(jié)果為將來布魯菌病高效、安全疫苗的研制和快速、準(zhǔn)確檢測方法的建立，以及細胞水平的疾病發(fā)生機理提供了必需的物質(zhì)材料。
【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：46 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
PCR擴增目的片段1：Omp19(534bp)；M：DL5000DNAMarkerFig2-2PCRamplificationfragment
圖 2-3 PCR 產(chǎn)物回收純化1：Omp19（534bp）；M：DL5000 DNA MarkerFigure 2-3 Recovery and purification of the PCR product1：Omp19（534bp）；M：DL5000 DNA MarkerpMD18-T Simple 載體連接連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化 DH5α 感受態(tài)細菌后，挑取單個菌落酶切，然后進行 1% 瓊脂糖凝膠電泳，并用凝膠 bp 處分別出現(xiàn)一條特異性條帶（如圖 2-4），與布魯8-T 的大小相符，表明目的片段與 pMD18-T Simp
圖 2-4 連接到 T 載體的目的片段 bp)和 pMD18-T Simple 載體（2 692bp）； M ：250 bp DNAFigure 2-4 The Purpose fragment connected to T vector4 bp)&pMD18-T Simple 載體（2 692bp）； M ：250 bp DNA物測序正確的Omp19基因與pMD18-T的連接產(chǎn)物送南京金的序列與Genbeank中布魯菌外膜蛋白Omp19基因標(biāo)列與 Genbeank 中公布序列的同源性均為 99% 以上（白 Omp19 基因已經(jīng)成功克隆。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]布魯氏菌病的研究與防控進展[J]. 任洪林,盧士英,周玉,李兆輝,柳增善. 中國畜牧獸醫(yī). 2009(09)
[2]布魯氏菌病國內(nèi)研究進展[J]. 司瑞,徐志凱. 地方病通報. 2006(05)
[3]布魯氏菌外膜蛋白OMP31基因的克隆、表達和免疫學(xué)特性的初步研究[J]. 陳瑤,駱利敏,李明. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2006(02)
[4]布魯氏菌DNA疫苗的發(fā)展:過去、現(xiàn)在和未來[J]. 曾政,鄧小紅. 國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊). 2005(03)
[5]三種血清學(xué)方法檢測奶牛布魯氏菌病的比較試驗[J]. 孫耀貴,黃美生,程佳. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2005(01)
[6]布氏菌病研究進展[J]. 尚德秋. 中國地方病防治雜志. 2004(04)
[7]布魯氏菌致病及免疫機制研究進展[J]. 柳建新,陳創(chuàng)夫,王遠志. 動物醫(yī)學(xué)進展. 2004(03)
[8]牛布氏桿菌病的檢測與防制[J]. 渠慎倫,魏成斌,師為重. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2004(04)
[9]布魯氏菌病感染與免疫研究近況(續(xù)前)[J]. 尚德秋. 中國地方病防治雜志. 2003(03)
[10]布魯氏菌病再度肆虐及其原因[J]. 尚德秋. 中國地方病防治雜志. 2001(01)
碩士論文
[1]布魯氏菌三個外膜脂蛋白的原核表達、純化及免疫原性實驗[D]. 馬長勝.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]布魯菌的分離鑒定及OMP25基因的克隆[D]. 張彥婷.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[3]布魯氏菌外膜蛋白Omp39和Omp14的原核表達及其免疫原性鑒定[D]. 李娜.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
本文編號：3001503
【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：46 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
PCR擴增目的片段1：Omp19(534bp)；M：DL5000DNAMarkerFig2-2PCRamplificationfragment
圖 2-3 PCR 產(chǎn)物回收純化1：Omp19（534bp）；M：DL5000 DNA MarkerFigure 2-3 Recovery and purification of the PCR product1：Omp19（534bp）；M：DL5000 DNA MarkerpMD18-T Simple 載體連接連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化 DH5α 感受態(tài)細菌后，挑取單個菌落酶切，然后進行 1% 瓊脂糖凝膠電泳，并用凝膠 bp 處分別出現(xiàn)一條特異性條帶（如圖 2-4），與布魯8-T 的大小相符，表明目的片段與 pMD18-T Simp
圖 2-4 連接到 T 載體的目的片段 bp)和 pMD18-T Simple 載體（2 692bp）； M ：250 bp DNAFigure 2-4 The Purpose fragment connected to T vector4 bp)&pMD18-T Simple 載體（2 692bp）； M ：250 bp DNA物測序正確的Omp19基因與pMD18-T的連接產(chǎn)物送南京金的序列與Genbeank中布魯菌外膜蛋白Omp19基因標(biāo)列與 Genbeank 中公布序列的同源性均為 99% 以上（白 Omp19 基因已經(jīng)成功克隆。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]布魯氏菌病的研究與防控進展[J]. 任洪林,盧士英,周玉,李兆輝,柳增善. 中國畜牧獸醫(yī). 2009(09)
[2]布魯氏菌病國內(nèi)研究進展[J]. 司瑞,徐志凱. 地方病通報. 2006(05)
[3]布魯氏菌外膜蛋白OMP31基因的克隆、表達和免疫學(xué)特性的初步研究[J]. 陳瑤,駱利敏,李明. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2006(02)
[4]布魯氏菌DNA疫苗的發(fā)展:過去、現(xiàn)在和未來[J]. 曾政,鄧小紅. 國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊). 2005(03)
[5]三種血清學(xué)方法檢測奶牛布魯氏菌病的比較試驗[J]. 孫耀貴,黃美生,程佳. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2005(01)
[6]布氏菌病研究進展[J]. 尚德秋. 中國地方病防治雜志. 2004(04)
[7]布魯氏菌致病及免疫機制研究進展[J]. 柳建新,陳創(chuàng)夫,王遠志. 動物醫(yī)學(xué)進展. 2004(03)
[8]牛布氏桿菌病的檢測與防制[J]. 渠慎倫,魏成斌,師為重. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2004(04)
[9]布魯氏菌病感染與免疫研究近況(續(xù)前)[J]. 尚德秋. 中國地方病防治雜志. 2003(03)
[10]布魯氏菌病再度肆虐及其原因[J]. 尚德秋. 中國地方病防治雜志. 2001(01)
碩士論文
[1]布魯氏菌三個外膜脂蛋白的原核表達、純化及免疫原性實驗[D]. 馬長勝.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]布魯菌的分離鑒定及OMP25基因的克隆[D]. 張彥婷.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[3]布魯氏菌外膜蛋白Omp39和Omp14的原核表達及其免疫原性鑒定[D]. 李娜.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
本文編號：3001503
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