鴨病毒性肝炎（Duck viral hepatitis, DVH）是由鴨病毒性肝炎病毒（Duck hepatitisvirus, DHV）引起的一種急性、高致死性傳染��；以肝炎為主要特征，主要發(fā)生在三周齡以內(nèi)雛鴨。我國鴨病毒性肝炎主要是由DHAV-1和DHAV-3引起的，雛鴨感染這兩種病毒后的臨床癥狀和病理變化極其相似，并且二者在臨床上混合感染比較普遍，給該病的有效診斷和防治帶來了極大困難。DHAV-1和DHAV-3共同流行是我國許多鴨場采取針對傳統(tǒng)基因型主動或被動免疫仍發(fā)生鴨病毒性肝炎的主要原因。本研究成功構(gòu)建了DHAV-3SD1101株全長cDNA感染性克隆，并對其部分生物學(xué)活性進行了研究。1、DHAV-3SD1101株感染性克隆的構(gòu)建及病毒的拯救在本實驗室已完成的SD1101株DHAV-3全基因組測序基礎(chǔ)上，根據(jù)載體pCDNA3.1+與病毒全基因組序列的酶切圖譜，設(shè)計并合成四對特異引物，應(yīng)用融合PCR技術(shù)分四段擴增DHAV全基因組cDNA，分段克隆到載體pCDNA3.1+中，獲得了DHAV-3SD1101株基因組全長cDNA克隆pSDDHAV。通過引物設(shè)計的方法，在cDNA的5’... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

DHAV-3病毒基因組結(jié)構(gòu)示意圖

圖 2-1 DHAV-3 SD1101 株 cDNA 全基因組感染性克隆構(gòu)建過程Fig. 2-1 Construction of the full-length cDNA clone of DHAV-3 SD1101各個片段具體克隆過程如下：（1）C 片段克�。喝鐖D 2-1 所示，用限制性內(nèi)切酶 NotⅠ、XhoⅠ分別雙酶切載體 pCDNA3.1+，酶切體系均為 60μL：10×H Buffer 6 μL，0.1%BSA6 μL，，NotⅠ 3 μL，XhoⅠ 3 μL，ddH2O 2 μL。膠回收各片段，然后用 T4 DNALigase 試劑盒（TaKaRa）連接 pCDNA3.1+載回收的 C 片段，連接體系為 10μL：pCDNA3.1+載體 1μL，純化 C 片段 7μL， Ligase Buffer 1μL，T4 DNA Ligase 1 μL，混勻后于 16℃下連接過夜，轉(zhuǎn)化。（2）D 片段克�。喝鐖D 2-1 所示，用 XhoⅠ、XbaⅠ分別酶切載體 pSDC 和 D體系均為 60μL：10×M Buffer 6 μL，DNA40μL，XbaⅠ 3 μL，XhoⅠ 3 μL，膠回收各自片段，然后用 T4 DNALigase 試劑盒（TaKaRa）連接 pSDC 載體與

接種后 36～96h 內(nèi)只有 3 只鴨胚死亡，收集尿囊液，取出胚體可見針尖大小出血點或出血斑（見圖 3-1）。圖3-1 接種后死亡的鴨胚胚體Fig. 3-1 The dead duck embryonic plant after inoculateing3.1.2 RT-PCR 鑒定結(jié)果收集死亡鴨胚的尿囊液進行總 RNA 提取后，進行 RT-PCR 反應(yīng)。可見有 871bp 大小的特異性條帶出現(xiàn)（圖 3-2）。圖3-2尿囊液病毒RT-PCR檢測結(jié)果Fig. 3-2 The result of RT-PCR detection about allantoic fluid samplesM. DL2000 DNAmarker; 1. Negative control 2. Result of RT-PCR

【參考文獻】：
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碩士論文
[1]新型鴨肝炎病毒全基因組測序及其VP1基因的克隆表達分析[D]. 趙立娜.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]實時熒光定量RT-PCR檢測1型鴨病毒性肝炎方法的建立和應(yīng)用[D]. 楊苗.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3001322