Six1是SIX轉(zhuǎn)錄因子家族（Sine oculis homeobox family, SIX）中重要的成員,在肌肉發(fā)生、生肌節(jié)形成及肌纖維類型分化等過程中起著重要作用。另外,Six1與其協(xié)同因子Eya2能直接上調(diào)mTOR的表達,誘導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成代謝增強,引起心肌生理性肥大,表明Six1在肌肉蛋白質(zhì)合成代謝過程中也發(fā)揮著重要的作用。但目前關(guān)于Six1與肌肉蛋白質(zhì)代謝的具體調(diào)控機制還未見報道。本研究通過鴨成肌細胞轉(zhuǎn)染真核表達載體pEGFP-duSix1,分析過表達Six1基因?qū)毎鲋郴钚约凹毎鞍踪|(zhì)代謝的影響。同時為深入探討Six1是否對蛋白質(zhì)合成的相關(guān)基因PI3K、mTOR具有調(diào)控作用,采用其特異性抑制劑LY294002、雷帕霉素處理鴨成肌細胞,再過表達Six1基因,探討Six1基因在細胞蛋白代謝過程中可能存在的具體調(diào)控途徑。結(jié)果表明：1、利用真核表達載體pEGFP-duSix1轉(zhuǎn)染鴨成肌細胞,發(fā)現(xiàn)Six1基因的mRNA表達量極顯著高于對照組（P<0.01）,細胞增殖活性明顯上升（P<0.05）,同時mTOR、S6K1的mRNA表達水平顯著上調(diào)（P<0.05）。We... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用詞語英文縮寫
前言
1 文獻綜述
    1.1 Six1基因在肌肉發(fā)育的功能研究
    1.2 調(diào)節(jié)肌肉蛋白質(zhì)代謝信號通路
        1.2.1 蛋白質(zhì)合成主要信號通路（PI3K/Akt/mTOR）
        1.2.2 蛋白質(zhì)降解主要信號通路
    1.3 RNA/Protein比值與細胞蛋白合成代謝的關(guān)系
    1.4 Six1參與調(diào)節(jié)肌細胞蛋白質(zhì)代謝
    1.5 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗樣品
        2.1.2 藥品和試劑
    2.2 試驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 總RNA提取及質(zhì)量檢測
        2.2.3 RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        2.2.4 引物設(shè)計及合成
        2.2.5 pEGFP-duSix1重組質(zhì)粒的抽提及鑒定
        2.2.6 熒光定量PCR
        2.2.7 Western-blot
        2.2.8 RNA/protein比值
        2.2.9 試驗數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 pEGFP-duSix1真核表達載體鑒定
    3.2 轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對細胞蛋白代謝的影響
        3.2.1 轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染后鑒定結(jié)果
        3.2.2 轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對細胞增殖活性的影響
        3.2.3 細胞轉(zhuǎn)染Six1對相關(guān)基因表達量的影響
        3.2.4 細胞轉(zhuǎn)染Six1對相關(guān)蛋白表達量的影響
        3.2.5 細胞轉(zhuǎn)染Six1對細胞總蛋白合成的影響
    3.3 LY294002處理及轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對細胞蛋白代謝的影響
        3.3.1 LY294002處理后轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對細胞增殖活性的影響
        3.3.2 LY294002處理后轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對相關(guān)基因表達量的影響
        3.3.3 LY294002處理后轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對相關(guān)蛋白表達量的影響
        3.3.4 LY294002處理后轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對細胞總蛋白合成的影響
    3.4 Rapamycin處理細胞及轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對細胞蛋白代謝的影響
        3.4.1 Rapamycin處理后轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對細胞增殖活性的影響
        3.4.2 Rapamycin處理后轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對相關(guān)基因表達量的影響
        3.4.3 Rapamycin處理后轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對相關(guān)蛋白表達量的影響
        3.4.4 Rapamycin處理后轉(zhuǎn)染pEGFP-duSix1對細胞總蛋白合成的影響
4 討論
    4.1 Six1與蛋白合成相關(guān)基因的調(diào)控關(guān)系
    4.2 Six1與蛋白降解相關(guān)基因的調(diào)控關(guān)系
    4.3 LY294002處理對細胞蛋白代謝的影響
    4.4 Rapamycin處理對細胞蛋白代謝的影響
    4.5 Sixl可能通過調(diào)控mTOR影響細胞蛋白合成
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
碩士研究生學(xué)習(xí)期間發(fā)表文章


【參考文獻】：
期刊論文
[1]運動與補充蛋白對骨骼肌產(chǎn)生的影響[J]. 韓萍,牛潔,張仁祥.  山西體育科技. 2009(04)
[2]Six1基因研究進展[J]. 鄭秀惠,李力.  國際腫瘤學(xué)雜志. 2009 (12)
[3]mTOR/p70s6k通路與運動誘導(dǎo)的肌肉蛋白質(zhì)合成[J]. 關(guān)尚一,張少生,李秋利,盧健.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(24)
[4]流式細胞儀檢測細胞體積及RNA/DNA比值[J]. 劉棟,劉志紅.  腎臟病與透析腎移植雜志. 1999(03)



本文編號：3000959