本研究旨在建立一種可靠的檢測豬δ冠狀病毒（porcine deltacoronavirus,PDCoV） IgG抗體的間接ELISA方法,了解四川地區(qū)PDCoV的流行情況。采用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)PDCoV膜蛋白（M）作為檢測抗原,通過反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了基于PDCoV M蛋白的間接ELISA方法,命名為PDCoV-rM-ELISA,并用該方法對430份臨床樣品進(jìn)行檢測。成功構(gòu)建了重組表達(dá)菌BL21-pET-32a-M,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后獲得了重組M蛋白,Western bolt檢測表明,重組蛋白具有良好的反應(yīng)原性。以其作為包被抗原建立的PDCoV-rM-ELISA方法僅對PDCoV血清檢測為陽性,與豬流行性腹瀉病毒等5種豬常見病原陽性血清均無交叉反應(yīng),具有良好的特異性;該方法靈敏性高、重復(fù)性好,批間和批內(nèi)重復(fù)性變異系數(shù)均小于10%;與成品化PDCoV抗體檢測試劑盒同時檢測48份臨床血清,兩種方法的陽性符合率為88.46%,陰性符合率為90.91%,總符合率為89.58%。臨床樣品檢測結(jié)果表明,各地樣本PDCoV抗體陽性率平均為11.86%,且統(tǒng)計學(xué)分析顯示,母豬比仔豬和育肥豬高2.25倍的P... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2020,51(07)北大核心

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【部分圖文】：

重組M蛋白的SDS-PAGE電泳及Western blot鑒定

表6 不同類型豬的抗體陽性數(shù)和符合率Table 6 The number of positive antibodies and coincidence rate of different types of pigs 類型Types 陽性Positive 陰性Negative 符合率/%Coincidence rate 仔豬Piglet 7 9 87.82 育肥豬Nursery pig 6 10 93.26 母豬Sow 12 4 92.30 這里的符合率是和PDCoV商品化試劑盒進(jìn)行比較The coincidence rate is compared with the N-ELISA kit in here圖3 四川地區(qū)PDCoV抗體陽性率分布圖

圖2 臨床血清樣品檢測結(jié)果表7 PDCoV感染的可能危險因素的邏輯回歸模型分析Table 7 Analysis of logistic regression models of possible risk factors associated with the PDCoV infection 變量Variables 比值比OR 95%置信區(qū)間95% CI P值P-value 年份 Years 2018 1 ref 0.187 2019 1.480 0.826～2.668 發(fā)育階段Life cycle of swine 仔豬+育肥豬 Piglets + nursery pigs 1 ref 0.011 母豬 Sows 2.248 1.200～4.215 ref代表參照ref represent references

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于豬丁型冠狀病毒重組S1蛋白間接ELISA抗體檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 侯林杉,賈敬亮,顧文源,劉寶京,師乾凱,袁廣富,陳少杰,范京惠,左玉柱.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2019(08)
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本文編號：3000367