發(fā)布時(shí)間：2021-01-25 14:49

　　東方巴貝斯蟲（Babesia orientalis）是一種寄生于水牛紅細(xì)胞內(nèi),由鐮形扇頭蜱經(jīng)卵傳播的血液原蟲,只引起水牛巴貝斯蟲病。該病主要分布在中國(guó)長(zhǎng)江以南,主要臨床癥狀為發(fā)熱、貧血、黃疸、血紅蛋白尿,嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致死亡,給我國(guó)水牛養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大損失。盡管對(duì)東方巴貝斯蟲的體外培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)、傳播媒介、分子分類學(xué)和診斷方法等有了一定的認(rèn)識(shí),但對(duì)其入侵機(jī)制還不了解,缺乏有效的抗原用于免疫診斷和預(yù)防。本研究在建立了東方巴貝斯蟲cDNA文庫(kù)的基礎(chǔ)上,通過免疫篩選挑選3個(gè)可能與免疫相關(guān)的基因,對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析,原核或真核表達(dá)及免疫原性研究。（1）B. orientalis cDNA文庫(kù)的免疫篩選用東方巴貝斯蟲陽(yáng)性的水牛血清對(duì)東方巴貝斯蟲裂殖子cDNA文庫(kù)進(jìn)行免疫篩選,挑選其中3個(gè)可能與免疫相關(guān)的基因：BoP34、BoP21和AMA1,對(duì)其進(jìn)行克隆測(cè)序和生物信息學(xué)分析。BoP34基因的核苷酸序列全長(zhǎng)為1088bp,包含兩個(gè)開放閱讀框（ORF）,編碼251個(gè)氨基酸,蛋白分子量約為34kDa。BLAST分析表明,BoP34與牛巴貝斯蟲核移動(dòng)蛋白（XM001611335）核苷酸序列的相似性為72%,... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 巴貝斯蟲入侵相關(guān)蛋白
        1.1.1 引言
        1.1.2 貝斯蟲入侵宿主細(xì)胞的過程
        1.1.3 巴貝斯蟲入侵相關(guān)抗原分子
    1.2 免疫機(jī)制
        1.2.1 非特異性免疫
        1.2.2 特異性免疫
2 研究目的意義
3 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 蟲株、血清和試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 菌種與質(zhì)粒
        3.1.3 酶及主要試劑
        3.1.4 主要溶液的配制
        3.1.5 主要儀器和設(shè)備
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 生物信息學(xué)分析網(wǎng)站及軟件
        3.2.2 cDNA文庫(kù)的免疫篩選
        3.2.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
        3.2.4 DNA模板的提取及DNA回收
        3.2.5 免疫相關(guān)基因的克隆
        3.2.6 原核表達(dá)及免疫特性研究
        3.2.7 AMA1基因的真核表達(dá)
4 結(jié)果分析
    4.1 免疫相關(guān)基因的篩選
    4.2 免疫相關(guān)基因的克隆分析
        4.2.1 免疫相關(guān)基因的PCR擴(kuò)增
        4.2.2 免疫相關(guān)基因重組質(zhì)粒的鑒定
        4.2.3 免疫相關(guān)基因的序列測(cè)定
        4.2.4 BoP34基因的生物信息學(xué)分析
        4.2.5 BoP21基因的生物信息學(xué)分析
        4.2.6 AMA1基因的生物信息學(xué)分析
    4.3 免疫相關(guān)基因的原核表達(dá)、蛋白純化及免疫特性研究
        4.3.1 免疫相關(guān)基因原核表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
        4.3.2 免疫相關(guān)基因的原核表達(dá)
        4.3.3 ELISA測(cè)定多克隆抗血清效價(jià)
        4.3.4 Western blot檢測(cè)重組蛋白的免疫反應(yīng)原性
        4.3.5 Western blot確定東方巴貝斯蟲中的3種免疫相關(guān)蛋白
    4.4 AMA1的真核表達(dá)
        4.4.1 AMA1截短序列的PCR擴(kuò)增
        4.4.2 重組質(zhì)粒的鑒定
        4.4.3 AMA1截短序列的真核表達(dá)與分析
5 討論
    5.1 cDNA文庫(kù)的篩選及其生物信息學(xué)分析
    5.2 免疫相關(guān)基因的原核表達(dá)及免疫反應(yīng)原性
    5.3 免疫相關(guān)蛋白多克隆抗體的制備及免疫反應(yīng)原性
    5.4 AMA1基因的真核表達(dá)分析
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]東方巴貝斯蟲核糖體蛋白L26全長(zhǎng)cDNA克隆及蛋白特性分析[J]. 劉琴,周丹娜,張穎,賀蘭,周艷琴,趙俊龍.  中國(guó)血吸蟲病防治雜志. 2009(02)
[2]東方巴貝斯蟲的18S rRNA基因的擴(kuò)增及系統(tǒng)發(fā)育研究[J]. 劉琴,付媛,周艷琴,周丹娜,江濤,王金蘋,趙俊龍,姚寶安.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(09)
[3]東方巴貝斯蟲分泌性抗原的免疫保護(hù)作用研究[J]. 趙俊龍,劉鐘靈,姚寶安,馬麗華,劉恩勇,丁明星,張德明,任憲武,彭伏虎,鐘龍群.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2000(02)
[4]寄生于中國(guó)水牛Bubalus　Vbubalis的巴貝斯蟲一新種（梨形蟲目:巴貝斯科）[J]. 劉鐘靈,趙俊龍,馬麗華,姚寶安.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 1997(01)
[5]湖北省水牛巴貝斯焦蟲病調(diào)查研究——Ⅱ.實(shí)驗(yàn)感染證實(shí)鐮形扇頭蜱是牛巴貝斯焦蟲和雙芽巴貝斯焦蟲的傳播者[J]. 劉鐘靈,馬麗華,高新山,程新階,楊待建,王生裕.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 1987(03)
[6]湖北省水牛巴貝斯焦蟲病調(diào)查研究[J]. 劉鐘靈,張光第,馬麗華,黃繼蓀,陳新階,高新山,楊待建.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 1986(01)
[7]雙芽巴貝斯焦蟲和牛巴貝斯焦蟲混合寄生水牛病例報(bào)導(dǎo)[J]. 陳守仁,楊峻,韓昌全,李漢民,吳海峰.  湖北畜牧獸醫(yī). 1984(04)

博士論文
[1]東方巴貝斯蟲新型診斷方法的建立和基因組序列測(cè)定與分析[D]. 賀蘭.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]東方巴貝斯蟲cDNA文庫(kù)構(gòu)建及其應(yīng)用[D]. 劉琴.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：2999412