雞傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病病毒引起的,主要侵害雛雞免疫器官的一種急性、接觸性、免疫抑制性病毒傳染病。IBDV感染雞群可造成雞群發(fā)病死亡、生產(chǎn)性能下降,尤其80年代以來(lái)vvlBDV的出現(xiàn),使雞群出現(xiàn)70%-100%的死亡率,造成直接的經(jīng)濟(jì)損失。傳染性法氏囊病病毒可引起雛雞免疫抑制性疾病,使雛雞免疫機(jī)能低下,降低對(duì)其他疫苗免疫應(yīng)答效力,增強(qiáng)對(duì)其他疫病的易感性,增加并發(fā)或繼發(fā)感染其它疾病的幾率,造成間接的損失。RNA病毒的RNA聚合酶高變區(qū)的高突變率導(dǎo)致IBDV抗原變異株和致弱毒株的出現(xiàn),他們可能是近年來(lái)IBD免疫后疫病頻發(fā)的一個(gè)重要原因之一。本病對(duì)于養(yǎng)禽業(yè)存在很大的危害,受到國(guó)內(nèi)外養(yǎng)殖業(yè)的普遍高度重視。河南省動(dòng)物性食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室從2011年1月到2012年12月從河南鄭州、洛陽(yáng)、焦作、濮陽(yáng)等地市共分離毒株35份,引起病變特征比較明顯和實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果比較確切的共有12份,從中選取4個(gè)分離株為重點(diǎn)研究對(duì)象,將分離自河南鄭州登封的雞傳染性法氏囊病病毒其命名為HN12分離株。以HN12株為代表采用常規(guī)方法和分子生物學(xué)方法進(jìn)行系統(tǒng)研究。該毒株經(jīng)過(guò)雞只發(fā)病特性、剖檢變化、實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)方法... 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
縮略語(yǔ)英漢對(duì)照表
摘要
文獻(xiàn)綜述
    1 雞傳染性法氏囊病概述
    2 IBDV的歷史簡(jiǎn)介
    3 IBDV病原學(xué)研究進(jìn)展
        3.1 IBDV的生物學(xué)特性
            3.1.1 病毒的分類(lèi)及形態(tài)結(jié)構(gòu)
            3.1.2 病毒的理化性質(zhì)
            3.1.3 病毒的增殖特性
            3.1.4 病毒的抗原性
        3.2 IBDV的分子生物學(xué)特性
            3.2.1 病毒基因組的結(jié)構(gòu)特性
            3.2.2 病毒蛋白結(jié)構(gòu)與作用
    4. IBDV的致病機(jī)制及毒力的分子基礎(chǔ)
        4.1 IBDV的致病性研究
        4.2 IBDV的毒力變異
        4.3 VP2和毒力間的關(guān)系
    5 IBDV的流行病學(xué)
    6 IBDV的診斷方法與技術(shù)
        6.1 病毒的分離鑒定
        6.2 血清學(xué)診斷方法
            6.2.1 瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)
            6.2.2 病毒血清中和試驗(yàn)
            6.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
            6.2.4 其他免疫學(xué)診斷方法
        6.3 分子生物學(xué)診斷技術(shù)
    7 IBDV的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
        7.1 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的起源
        7.2 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方法
            7.2.1 貼壁培養(yǎng)
            7.2.2 懸浮培養(yǎng)
        7.3 IBDV適應(yīng)增殖的細(xì)胞
引言
試驗(yàn)一 雞傳染性法氏囊病病毒的分離鑒定
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 主要儀器
            1.1.2 SPF雞胚及SPF雞
            1.1.3 IBDV抗原和標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清
        1.2 方法
            1.2.1 病料來(lái)源
            1.2.2 病料處理
            1.2.3 瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）
            1.2.4回歸易感雞試驗(yàn)
            1.2.5 病毒在SPF雞胚上的分離培養(yǎng)
            1.2.6 分離株毒力測(cè)定
            1.2.7 引物合成
            1.2.8 RT-PCR擴(kuò)增鑒定
    2 結(jié)果
        2.1 瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）
        2.2 動(dòng)物回歸試驗(yàn)
        2.3 病毒在SPF雞胚上傳代結(jié)果
        2.4 IBDV分離株毒力測(cè)定
            2.4.1 SPF雞只發(fā)病情況及剖檢變化
            2.4.2 SPF雞只發(fā)病率及死亡率
            2.4.3 SPF雞胚病變
50的測(cè)定">            2.4.4 分離株ELD₅₀的測(cè)定
        2.5 PCR檢測(cè)結(jié)果
    3 結(jié)論
    4 討論
試驗(yàn)二 分離株細(xì)胞馴化培養(yǎng)及特性研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 主要儀器設(shè)備
            1.1.2 耗材
            1.1.3 主要試劑及配制
            1.1.4 細(xì)胞與毒株
        1.2 方法
            1.2.1 DF-I細(xì)胞培養(yǎng)
            1.2.2 IBDVHN12株在DF-1細(xì)胞上培養(yǎng)條件優(yōu)化
            1.2.3 IBDV細(xì)胞適應(yīng)毒株毒力測(cè)定
            1.2.4 細(xì)胞適應(yīng)毒株的理化特性
    2 結(jié)果與分析
        2.1 IBDV在DF-1細(xì)胞上培養(yǎng)條件優(yōu)化
            2.1.1 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
            2.1.2 IBDV最佳接毒量的確定
            2.1.3 IBDV接種細(xì)胞吸附時(shí)間的確定結(jié)果
            2.1.4 血清濃度對(duì)IBDV增殖的影響
        2.2 細(xì)胞適應(yīng)毒株AGID檢測(cè)
        2.3 細(xì)胞適應(yīng)毒株毒力
            2.3.1 DF-1細(xì)胞病變
            2.3.2 TCIDso測(cè)定
        2.4 IBDV細(xì)胞適應(yīng)毒株的理化試驗(yàn)結(jié)果
            2.4.1 病毒的凝集試驗(yàn)結(jié)果
            2.4.2 有機(jī)溶劑試驗(yàn)和耐酸堿性試驗(yàn)
            2.4.3 耐熱性試驗(yàn)結(jié)果表明
    3 結(jié)論
    4 討論
試驗(yàn)三 分離株原毒、雞胚毒和細(xì)胞毒VP2的克隆及序列分析
    l材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 主要儀器設(shè)備
            1.1.2 毒株
            1.1.3 菌株及載體
            1.1.4 主要生物學(xué)試劑
            1.1.5 試劑配制
        1.2 方法
            1.2.1 病料的處理
            1.2.2 引物設(shè)計(jì)及合成
            1.2.3 病毒RNA的提取
            1.2.4 反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）擴(kuò)增
            1.2.5 1%瓊脂糖凝膠電泳
            1.2.6 PCR產(chǎn)物的回收與純化
            1.2.7 重組克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
            1.2.8 重組質(zhì)粒的鑒定
            1.2.9 3株不同IBDV適應(yīng)毒株核苷酸序列測(cè)定及序列分析
            1.2.10 各適應(yīng)毒株系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
            1.2.11 各適應(yīng)毒株2級(jí)結(jié)構(gòu)比較分析
    2 結(jié)果與分析
        2.0 IBDV不同適應(yīng)毒株VP2的RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果
        2.1 IBDV不同適應(yīng)毒株VP2基因片段PCR產(chǎn)物純化結(jié)果
        2.2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定及測(cè)序鑒定
        2.3 IBDVVP2基因片段的測(cè)序及序列分析
            2.3.1 3株IBDVVP2間基因片段及推導(dǎo)的氨基酸比較分析
            2.3.2 各適應(yīng)毒株同源性比較分析
            2.3.3 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
            2.3.4 3株IBDV適應(yīng)毒株VP2基因2級(jí)結(jié)構(gòu)比較分析
    3 結(jié)論
    4 討論
試驗(yàn)四 分離株囊毒、胚毒和細(xì)胞毒對(duì)SPF雞免疫效果實(shí)驗(yàn)
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 毒株
            1.1.2 種蛋及SPF雞
            1.1.3 主要儀器設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 病毒準(zhǔn)備
            1.2.2 病毒毒力測(cè)定
            1.2.3 不同毒株滅活免疫乳化劑的制備
            1.2.4 安全性檢驗(yàn)
            1.2.5 效力檢驗(yàn)
            1.2.6 血清AGID滴度檢測(cè)
            1.2.7 血清中和試驗(yàn)
            1.2.8 免疫保護(hù)試驗(yàn)
    2 結(jié)果
        2.1 病毒毒力測(cè)定
50測(cè)定">            2.1.1 HN12B1毒株ELD₅₀測(cè)定
50測(cè)定">            2.1.2 HN12E4毒株ELD₅₀測(cè)定
50測(cè)定">            2.1.3 HN12C8毒株TCID₅₀測(cè)定
        2.2 安全試驗(yàn)
        2.3 血清AGID滴度測(cè)定
        2.4 中和試驗(yàn)結(jié)果
        2.5 免疫保護(hù)試驗(yàn)
    3 結(jié)論與討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄一：VP2推導(dǎo)氨基酸序列對(duì)比
英文摘要


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]4種病毒在細(xì)胞上達(dá)最大吸附量所需時(shí)間測(cè)定[J]. 張晉強(qiáng),牛麗,宋美琴,白喜云.  山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2011(04)
[2]基于不同引物的RT-PCR檢測(cè)IBDV敏感性的比較[J]. 王艷,李樹(shù)清,孫建和,汪振興,陳志飛,張強(qiáng),王巧全,嚴(yán)亞賢.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2010(03)
[3]雞傳染性法氏囊病病毒Gt株VP5基因缺失株感染性克隆的構(gòu)建[J]. 秦立廷,祁小樂(lè),高玉龍,高宏雷,步志高,王笑梅.  微生物學(xué)報(bào). 2008(12)
[4]雞傳染性法氏囊病病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性研究[J]. 曹永萍,曹光偉.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2008(11)
[5]獸醫(yī)傳染病學(xué)學(xué)科發(fā)展現(xiàn)狀與展望[J]. 陳煥春,周銳,肖少波,何啟蓋,宋云峰.  中國(guó)家禽. 2008(11)
[6]傳染性法氏囊病及其病原分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 何秀苗,陽(yáng)秀英,韋平.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2007(02)
[7]雞傳染性法氏囊病間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研制[J]. 馬飛.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2005(06)
[8]雞傳染性法氏囊病超強(qiáng)毒Gx及其致弱株基因組B節(jié)段的克隆和序列分析[J]. 包曉瑋,張厚雙,高宏雷,付朝陽(yáng),彭志偉,單文魯,王笑梅.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2005(02)
[9]IBDV強(qiáng)毒株感染SPF雞后法氏囊淋巴細(xì)胞的凋亡及調(diào)控機(jī)制[J]. 劉玉鋒,佘銳萍,李慧姣,梁明珍,彭芳珍.  中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(03)
[10]傳染性法氏囊病病毒上海超強(qiáng)毒株VP2-4-3基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與表達(dá)[J]. 蔣靜,孫建和,陸蘋(píng).  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(02)



本文編號(hào)：2997252