豬圓環(huán)病毒3型（PCV3）是2015年發(fā)現(xiàn)的一個新型病毒,到目前為止PCV3在全球呈流行趨勢,而患有繁殖障礙的母豬經(jīng)常被該病毒感染,并且在患有某些疾病中可以檢測的到該病毒,出現(xiàn)了共感染的現(xiàn)象。PCV3對全球的養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成了一定的經(jīng)濟損失,并且到目前為止PCV3無法在傳代細胞中進行分離培養(yǎng)。為了減少PCV3對我國養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成的經(jīng)濟損失,并對其致病機理的研究提供支持,本研究利用河北株（GenBank登錄號:MK105924）PCV3的全基因組序列構(gòu)建感染性克隆,并將其轉(zhuǎn)染到傳代細胞中進行增殖。對河北株和全球的PCV3基因組進行序列分析,以進一步了解該病毒的結(jié)構(gòu)特征、致病機理及其分布與地域之間的關(guān)系,為該病的防控提供理論基礎(chǔ)。在華北地區(qū)采集到的病料中,發(fā)現(xiàn)了一株新的PCV3毒株。為了擴增這株新PCV3毒株的整個基因組序列,利用兩對引物對其進行擴增,將所得到的產(chǎn)物進行基因組的序列測定后,獲得了 PCV3的全基因組序列,并將其命名為河北株P(guān)CV3。對這一全基因組序列構(gòu)建感染性克隆,獲得了重組質(zhì)粒,將構(gòu)建的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到PK-15細胞中,并連續(xù)傳15代。繪制了河北株的基因圖譜,選取9株河北省PCV... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１病變淋巴結(jié)的ＰＣＶ３檢測結(jié)果??Ｆｉｇ．?１?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＰＣＶ３?ｉｎ?ｄｉｓｅａｓｅｄ?ｌｙｍｐｈ?ｎｏｄｅｓ??

?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ??ｐａｉｒ?ｏｆ?ｐｒｉｍｅｒｓ；?２：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ?ｐａｉｒ?ｏｆ?ｐｒｉｍｅｒｓ；?２：?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??３．１．３感染性克隆陽性菌液的鑒定??為了檢驗白色菌落是否為陽性菌落，運用ＰＣＶ３鑒定引物通過ＰＣＲ對培養(yǎng)的兩個陽性菌液進??行檢測，電泳結(jié)果顯示（閣３）在陽性尚液中檢測到了?ＰＣＶ３，證明ＰＣＶ３感染性克隆構(gòu)建成功。??Ｍ?１?２?３??４１８ｂｐ??Ｉ，??圖３陽性菌液的ＰＣＲ產(chǎn)物??Ｆｉｇ．?３?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｌｉｑｕｉｄ??？；ｉ：：?Ｍ：丨）丨．２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１：陽件菌液Ｉ；?２：陽性菌液２：?３：空白對照。??Ｎｏｔｅ：?Ｍ?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｓｏｌｕｔｉｏｎ?１．２：?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｓｏｌｕｔｉｏｎ?１；?３：?ｂｌａｎｋ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??２３??

?河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文???３．１．４?ＰＣＶ３質(zhì)粒的酶切鑒定??為了檢驗感染性克隆是否成功，利用Ｘｈｏｌ內(nèi)切酶對ｐｃＤＮＡ３．］?（?＋?）－ＰＣＶ３進行酶切鑒定，??鑒定結(jié)果如圖４。??Ｍ?１?２??１２０００ｂｐ???ＳＯＯＯｂｐ－——ｐｔ秦瓣尋＿；？：＿觸??Ｔ〇＾?．?ｈ??４０００ｂｐ?齡“?？識屬趣々讀Ｈ??；?一一?＇廣??２０００ｂｐ——；：ｉＪ§�。�；；＾；??１５００ｂｐ￣；?］??＿ｂｐ—隊?Ｉ??７５〇ｂｐ—?ｒｇｒ－??２５。卜?Ｅｉ：?—」??圖４酶切鑒定ＰＣＶ３質(zhì)粒??Ｆｉｇ．?４?ＰＣＶ３?ｐｌａｓｍｉｄ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｂｙ?ｅｎｚｙｍｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ??注：Ｍ：?ＤＬ１２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１：?ｐｃＤＮＡ３．１?（?＋?）?－ＰＣＶ３?被?Ｘｈｏｌ?內(nèi)切酶進行酶切：２：?ｐｃＤＮＡ３．１?（?＋?）?－ＰＣＶ３〇??Ｎｏｔｅ：?Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?Ｉ：?ＰｃＤＮＡ３?１?（＋）－ＰＣＶ３?ｗａｓ?ｃｌｅａｖｅｄ?ｂｙ?Ｘｈｏｌ?ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ；?２：?ＰｃＤＮＡ３．１?（＋）－ＰＣＶ３．??３．１．５?ＰＣＶ３河北株序列特征分析??為了進一步的了解ＰＣＶ３河北株（ＧｅｎＢａｎｋ登錄號：ＭＫ１０５９２４）基因序列的特征，繪制了??基因圖譜（圖５）并對其進行分析。從圖中我們可以看到有３個開放閱讀框（ＯＲＦｓ），分別為??ＯＲＦ１、０ＲＦ２和０ＲＦ３，每個開放閱讀框編碼的蛋白質(zhì)都大于２００個氨基酸，０ＲＦ１和ＯＲＦ２的??編碼方向相反，而ＯＲＦ］和ＯＲＦ３的編碼方向相同

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2995366