發(fā)布時間：2021-01-21 02:17

　　為深入研究乙型腦炎病毒（JEV）NS1和NS1-2A蛋白的表達和免疫效果差異,本試驗構(gòu)建并擴增C-端含F(xiàn)lag標(biāo)簽的NS1和NS1-2A基因,利用T4 DNA連接酶分別連接到質(zhì)粒pcDNA3.1（+）上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag。將這兩種真核表達質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞,利用RT-PCR、IFA和Western blotting檢測NS1和NS1-2A蛋白在體外的表達情況,用pcDNA3.1-NS1-Flag、pcDNA3.1-NS1-2A-Flag和pcDNA3.1（+）免疫BALB/c小鼠,檢測這兩種蛋白在體內(nèi)的表達差異。結(jié)果顯示,試驗成功構(gòu)建了NS1和NS1-2A基因的真核表達載體pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag,IFA和Western blotting鑒定NS1和NS1-2A蛋白成功表達,重組質(zhì)粒pcDNA3.1-NS1-Flag和pcDNA3.1-NS1-2A-Flag免疫小鼠后可誘發(fā)機體產(chǎn)生特異性體液免疫,pcDNA3.1-NS1-2A-Flag聯(lián)合免疫組小鼠血清... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

NS1-2A-Flag和NS1-Flag PCR擴增結(jié)果

重組質(zhì)粒pcDNA3.1-NS1-2A-Flag和pcDNA3.1-NS1-Flag的雙酶切鑒定結(jié)果

NS1-Flag和NS1-2A-Flag融合蛋白在BHK-21細(xì)胞中表達,大小分別約為48.7和66.4 ku(圖5),Western blotting結(jié)果與預(yù)期結(jié)果相符,同NS1-2A-Flag具有較好的反應(yīng)原性。圖4 間接免疫熒光法檢測NS1、NS1-2A蛋白在BHK-21細(xì)胞中的表達(100×)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]我國流行性乙型腦炎研究近況[J]. 蔡寶祥.  畜牧與獸醫(yī). 2012(07)
[2]登革病毒2型NS1蛋白DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫效果觀察[J]. 江麗芳,高陽,方丹云,周俊梅.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2003(10)



本文編號：2990252