旨在獲得產(chǎn)氣莢膜梭菌β毒素（CPB）的重組突變體,并評價其毒力及免疫保護性。對已知的產(chǎn)氣莢膜梭菌CPB編碼基因進行優(yōu)化設計,同時引入4個氨基酸突變位點,分別是第212位的精氨酸突變?yōu)楣劝彼?第268位的亮氨酸突變?yōu)楦拾彼?266位的酪氨酸和275位的色氨酸突變?yōu)楸彼�。此�?在該基因5′端添加Th細胞表位（T）和鞭毛蛋白（flagellin）N末端的編碼序列,經(jīng)人工合成獲得重組基因片段(GTF_NCPB_m4)。將GTF_NCPB_m4克隆至原核表達載體pET-30a （+）中進行表達與純化,獲得重組蛋白rTF_NCPB_m4。利用Western blot方法檢測rTF_NCPB_m4與C型產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素抗血清的反應性,并檢測rTF_NCPB_m4對小鼠的毒力。隨后,以rTF_NCPB_m4免疫家兔,按照《中華人民共和國獸藥典》（2015年版）規(guī)定... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學報. 2020,51(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

重組原核表達質粒pTFNCPBm4的酶切鑒定

SDS-PAGE和Western blot檢測結果顯示,在15和37 ℃的誘導條件下,rTFNCPBm4均主要以包涵體的形式表達(圖2a),相對分子質量約為49 ku,且能與抗His標簽抗體發(fā)生反應(圖2b)。綜合誘導時間,確定rTFNCPBm4的最適誘導表達條件為37 ℃, 誘導4 h。2.3 rTFNCPBm4的純化與鑒定

rTFNCPBm4的純化

【參考文獻】：
期刊論文
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