發(fā)布時(shí)間：2021-01-19 13:29

　　白細(xì)胞介素17（interleukin-17,IL-17）是Th17細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子,被認(rèn)為是一種關(guān)鍵的炎性細(xì)胞因子,在宿主抵抗胞外菌、真菌感染,以及炎癥、超敏反應(yīng)、自身免疫性疾病等多種疾病的病程中起到了重要的作用。為研究IL-17A對(duì)山羊乳腺上皮細(xì)胞免疫防御功能的影響,本研究根據(jù)GenBank公布的奶山羊IL-17A完全CDS區(qū)序列設(shè)計(jì)了真核表達(dá)引物,從Con A活化的奶山羊外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）中提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄PCR法擴(kuò)增目的序列。擴(kuò)增出的目的片段連接于真核表達(dá)載體pEGFP-N1,并轉(zhuǎn)入大腸桿菌Trans5α感受態(tài)細(xì)胞保存,將鑒定正確的重組質(zhì)粒命名為IL-17A-pEGFP-N1。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入HEK293T細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),收取真核表達(dá)上清作為刺激物。選取成年健康奶山羊,通過組織塊貼壁法制備原代山羊乳腺上皮細(xì)胞（GMEC）。用IL-17A真核表達(dá)上清（終質(zhì)量濃度:15 mg/L）刺激山羊乳腺上皮細(xì)胞,通過Real-time PCR方法檢測(cè)GMEC分泌的各種促炎性細(xì)胞因子、趨化因子以及防御性蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果表明,IL-17A可以促進(jìn)山羊乳腺上皮原代細(xì)胞... 

【文章來源】：中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,40(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 動(dòng)物、細(xì)胞、菌株及載體
    1.2 試劑
    1.3 山羊IL-17A真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.4 山羊IL-17A的真核表達(dá)
    1.5 原代山羊乳腺上皮細(xì)胞的制備
    1.6 IL-17A體外刺激山羊乳腺上皮細(xì)胞
    1.7 促炎性細(xì)胞因子和免疫防御相關(guān)因子mRNA表達(dá)水平變化
2 結(jié)果
    2.1 山羊IL-17A真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.2 山羊IL-17A的真核表達(dá)
    2.3 原代山羊乳腺上皮細(xì)胞的制備
    2.4 IL-17A對(duì)山羊乳腺上皮細(xì)胞分泌促炎性細(xì)胞因子和免疫防御相關(guān)因子mRNA表達(dá)水平的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[J]. 王楨,羅軍,王偉,趙旺生,林先滋.  生物工程學(xué)報(bào). 2010(08)



本文編號(hào)：2987079