哺乳動(dòng)物生物鐘作為一種重要的調(diào)控系統(tǒng),存在于生物體幾乎所有的組織和細(xì)胞中,通過調(diào)控生物鐘控制基因節(jié)律表達(dá)維持生物體以接近24 h為周期的各種生理功能變化。生物鐘系統(tǒng)與動(dòng)物配子發(fā)生、內(nèi)分泌調(diào)控密切相關(guān),小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞生物鐘參與調(diào)控睪酮的合成,但具體的分子機(jī)制還不清楚。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)作為真核細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成、折疊、分泌及儲(chǔ)存Ca²⁺的重要場所,對(duì)維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)及正常功能具有重要作用。UPR（未折疊蛋白反應(yīng)）信號(hào)通路通過誘導(dǎo)miR 211瞬時(shí)抑制生物鐘基因Bmal1和Clock的表達(dá),提供了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控生物鐘的直接證據(jù)。衰老的雄性哺乳動(dòng)物血清睪酮含量下降,且伴隨顯著的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激現(xiàn)象。綜上所述,是否存在一條內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控生物鐘信號(hào)通路,從而影響衰老小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮的合成,亟待進(jìn)一步的深入研究。本研究選用生物鐘基因Bmal1敲除小鼠模型、小鼠胎兒成纖維細(xì)胞（NIH3T3）和小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞,利用免疫熒光染色、實(shí)時(shí)生物熒光測定系統(tǒng)、qPCR、Western blotting、ELISA和RNAi等技術(shù),研究衰老引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞生物鐘調(diào)控睪酮合成的分子機(jī)制。已... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：155 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮合成的調(diào)控通路（Trembly，2015）

西北農(nóng)林科技大學(xué)博士學(xué)位論文domain-containing protein 2）首先結(jié)合形成二聚體 (Sato et al. 2004)，進(jìn)入細(xì)胞核，激活順勢(shì)作用元件 E-box（5′-CACGTG-3′）或 E′-box（5′-CACGTT-3′）的活性，從而啟動(dòng)下游 PER 和 CRY 的轉(zhuǎn)錄和翻譯(Buhr and Takahashi, 2013)。細(xì)胞質(zhì)中的阻遏蛋白 PER和 CRY 達(dá)到臨界濃度時(shí)，就會(huì)形成復(fù)合物，通過抑制 CLOCK/BMAL1 復(fù)合物來抑制自身的表達(dá)。除 E-box 外，PER 蛋白的啟動(dòng)子區(qū)域還包含 D-box，通過與 D-box 結(jié)合，轉(zhuǎn)錄激活因子（DBP、TEF 和 HLF）的 PAR-bZIP 家族和相關(guān)抑制因子 E4BP4 對(duì)靶基因的表達(dá)產(chǎn)生相反的作用(Emery and Reppert, 2004)。此外，REV-ERBs 和 RORs 能分別抑制和促進(jìn) BMAL1/CLOCK 的轉(zhuǎn)錄(Emery and Reppert, 2004)，過量的 PER 能抑制REV-ERB 的活性等(Toh et al. 2001)，這些輔助反饋通路也參與維持生物鐘系統(tǒng)的穩(wěn)定。

西北農(nóng)林科技大學(xué)博士學(xué)位論文當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激激活時(shí)，從 GRP78 解離的 PERK 會(huì)發(fā)生自身磷酸化，激活一系列的信號(hào)通路，包括磷酸化真核翻譯起始因子 2α（eIF2α）和激活轉(zhuǎn)錄因子 4（ATF4）的翻譯，從而引起 C/EBP 同源蛋白（CHOP）的轉(zhuǎn)錄(Harding et al. 1999 , Ma et al. 2002 , Hetz,2012)。一旦內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激激活，IRE1 會(huì)發(fā)生自身磷酸化，從而在 X-box 結(jié)合蛋白 1（XBP1）的 mRNA 中剪接含 26 個(gè)堿基內(nèi)含子(Flamment et al. 2012)。剪接型的 XBP1（sXBP1）能夠上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)因子和其他因子的表達(dá)，增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的折疊程度(Tirasophon et al.1998)。ATF6 從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)移到高爾基體，在此被位點(diǎn) 1 和位點(diǎn) 2 蛋白酶（S1P 和 S2P）切割(Haze et al. 1999)。切割后的 ATF6 N 段被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核，并與 ATF4 和 sXBP1 聯(lián)合作用，以增加蛋白質(zhì)水平并減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。UPR 是一種保守型細(xì)胞自我保護(hù)性措施，主要通過抑制 mRNA 的轉(zhuǎn)錄，增強(qiáng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的折疊能力和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)的蛋白降解等措施來減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的生理壓力進(jìn)而恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)(Walter and Ron, 2011)。


本文編號(hào)：2984904