為了建立一種基于雙探針雜交的PCR檢測(cè)方法,用于雞心包積液綜合征病原的鑒別檢測(cè)。根據(jù)GenBank收錄的FAdV-4六鄰體hexon基因序列特征,選取2段長(zhǎng)度為20 bp、序列相鄰的保守區(qū)作為雙探針,標(biāo)記于報(bào)告基因大豆Lectin基因片段兩端,用于PCR檢測(cè),建立了FAdV-4環(huán)介導(dǎo)PCR檢測(cè)方法,擴(kuò)增片段大小362 bp。靈敏性和特異性試驗(yàn)結(jié)果表明,該方法可以檢出FAdV-4的最低極限濃度為7.85 pg/μL的核酸樣品,與FAdV-11、NDV、IBDV、CIAV、IBV和MDV等其他常見禽病原體無明顯交叉反應(yīng)。利用所建立的方法對(duì)103份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,環(huán)介導(dǎo)PCR對(duì)FAdV-4檢出率35.0%,高于常規(guī)PCR（32.0%）而接近于SYBR Green實(shí)時(shí)PCR（35.9%）;Kappa值檢驗(yàn)結(jié)果顯示,環(huán)介導(dǎo)PCR和SYBR Green實(shí)時(shí)PCR對(duì)FAdV-4檢測(cè)結(jié)果之間高度符合,Kappa值為κ=0.98。本試驗(yàn)成功建立了FAdV-4環(huán)介導(dǎo)PCR檢測(cè)方法,可用于FAdV-4的臨床檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查。 

【文章來源】：中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2020,56(06)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

Hexon 雙探針標(biāo)記報(bào)告基因制備

環(huán)介導(dǎo)PCR檢測(cè)FAdV-4結(jié)果

特異性試驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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