豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是一種主要以妊娠母豬的繁殖障礙和仔豬嚴(yán)重的呼吸道癥狀為主要特征的傳染病。PRRS自暴發(fā)以來，給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病的病原體-豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV），屬于動脈炎病毒科動脈炎病毒屬，為有囊膜的單股正鏈RNA病毒。本實驗室成功構(gòu)建了CH-1R致弱毒株（CH-1a傳代第171代）的全長cDNA分子克隆rCH-1R，并獲得了該克隆的拯救病毒-recCH-1R。在本研究中，將PCV2-Cap基因插入到rCH-1R的ORF1b和ORF2a之間；然后，分別用高致病性PRRSVHuN4株的GP5基因和GP5+M基因替換rCH-1R株的相應(yīng)基因，最終成功獲得了3株嵌合病毒：recCH-1R-PCV2-Cap、recCH-1R-HuN4-GP5和recCH-1R-HuN4-GP5+M。通過RT-PCR檢測、細(xì)胞病變觀察、間接免疫熒光試驗、電鏡觀察和一步生長... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PRRSV粒子結(jié)構(gòu)模式圖

中 國農(nóng) 業(yè) 科 學(xué)院 碩士 學(xué)位 論文 第 一章 引 言O(shè) RF （s C o n z el m a nn et a l. , 1 99 3 ） ，它們 具 有 病 毒 基 因 組 RN A5 ’端 非 編 碼 區(qū) 共 同 的 前 導(dǎo) 序列 （圖 1 .2 ） 。病毒 基 因 組 的 mR N A1 轉(zhuǎn) 錄 2 個 O RF s - O RF 1 a 和 O RF 1 b ，主 要 編碼 病 毒的 復(fù) 制酶 蛋 白， 位 于基 因 組 5’ 端 約四 分 之三 處 。 O RF 1 a 和 O RF 1 b 編碼 2 個長 的非 結(jié) 構(gòu) 蛋白 多 聚蛋 白 （ po l y p r o te i n ） - pp 1 a和 pp 1 a b， 后 者的 表 達(dá) 取決 于 在 O RF 1 a 和 O RF 1 b 重疊 區(qū)域 的 核 糖體 移 碼 信號 （d e n Bo o n et a l. , 1 99 1 Sn i j d e r ＆ Me u l e n be r g, 19 98 ） ， 在基 因 組 mR N A 合成 之后 ， 通 過由 O RF 1 a 編碼 的 蛋白 酶 結(jié) 構(gòu)域 引 導(dǎo)的 1 個復(fù) 雜 的 蛋 白 水解 級聯(lián) 反 應(yīng) ， pp 1a 和 pp 1a b 復(fù)制 多 聚 蛋 白 被加 工 成具 有 功 能 性 的非 結(jié) 構(gòu) 蛋 白（ N on - st r uc t ur e pr ot ei n s , N sp s ）（S n ij d er ＆ Me u l e n b er g, 19 98 ; va n Ak en et a l. , 20 0 6b ; Zi e bu hr et a l. 20 0 0 ）， 有 14 種 ， 包 含 4 種 蛋白 酶 N sp 1 α 、 N sp 1 β 、 N sp 2 和 N sp 4 ， N sp 9 是 1 種 RN A 依 賴性 的RN A 聚 合酶 （R N A- de p e nd e nt RN A po ly m e r a se , Rd R p ），N sp 1 0 是 1 種 RN A 解旋 酶 （H el i c a se , H el ），N sp 1 1 是 1 種 核 酸 內(nèi) 切 酶 （ en d o nu c le a se ）（ D en Bo o n et a l. , 1 99 5 ; Sn i j d er ＆ Me u l e n be r g, 19 9 8; va nAk e n et

業(yè) 科 學(xué)院 碩士 學(xué)位 論文 第 一用 途 （ P e i et a l. , 20 09 ） 。細(xì) 胞 因 子 IL - 1β 作 為感 染 中的 1 個潛 在 的 炎 性 調(diào)節(jié) 因 子， 常 被 劑 ，有 研 究者 將 豬 IL - 1β 插入 到 感 染 性 克隆 P1 2 9 的 O RF 1 b 和 O RF 2 a 之間 ， 構(gòu) 建 了 重 9 /s w I L1 β ，在 該 病毒 感 染 Ma rc - 1 45 細(xì) 胞 3 6 h 之后 ， 每 2 × 10 5個細(xì) 胞能 分 泌 19 4 7 pg 的實 驗 顯 示 ，v P 1 2 9 /s w IL 1 β感 染 豬沒 有 出現(xiàn) 可 見的 臨 床 標(biāo) 志 ，而 親 本病 毒 感染 豬 具有 非 吸 窘 迫 和 嗜睡 現(xiàn) 象 。在 感 染后 7 d 和 1 4 d， 外 周 血 中 IL - 1β 、 I L - 4 和 IF N - γ 表達(dá) 量上 調(diào) 組 PR R S V 可 以作 為 研究 不 同 細(xì) 胞 因子 在 疾病 進(jìn) 程 和 免疫 反 應(yīng)中 功 能的 有 用 的 工 具 （, 20 1 2） 。哈爾 濱 獸 醫(yī) 研究 所 對國 內(nèi) PR R S V 經(jīng)典 株 CH - 1a 株致 弱 過程 中 4 個 不同 代 次毒 株 進(jìn) 行 隆 和 測 序 ，分 析 其傳 代變 化 情 況 （ 石文 達(dá) 等 ， 2 01 0 ） ，并 在 此基 礎(chǔ) 上構(gòu) 建 了 CH -1 R 致H - 1a 傳代 第 17 1 代） 全長 cD N A 分子 的克 隆 （圖 1. 3） ，成 功地 拯 救了 該 病 毒 。 PR R S V因 組 全 長 1 54 2 4 nt ，采 用 人 類 巨 細(xì) 胞 病 毒 （ h u m a n cy t o m e g a lo v ir u s , hC MV ）啟 動 子 ， 粒 D NA 能夠 直 接 轉(zhuǎn)染 至 Ma rc - 1 45 細(xì)胞 ， 并 產(chǎn) 生細(xì) 胞 病 變。 在 r ec C H - 1R 93 72 b p 處引 ， 插 入 唯 一 的 酶 切位 點 Sp e Ⅰ作 為遺 傳 標(biāo)記 ，該 子 代病 毒 與親 本 毒株 CH - 1 a 相比 ，在 性 和 體 內(nèi) 致病 性 上


本文編號：2981383