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犬副流感弱毒疫苗株全基因組序列分析及基因組全長cDNA克隆質(zhì)粒、輔助質(zhì)粒的構(gòu)建

發(fā)布時(shí)間:2021-01-16 17:55
  犬副流感(Canine parainfluenza)是由犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus,CPIV)引起的一種犬的呼吸道傳染病,臨床上以發(fā)熱、咳嗽和流涕為特征。CPIV也可引起急性腦脊髓炎和腦積水,臨床表現(xiàn)為后肢麻痹和運(yùn)動失調(diào)等。疫苗接種能有效預(yù)防該病,弱毒疫苗是目前使用最為廣泛的犬副流感疫苗。本研究對犬副流感弱毒疫苗株NL/CPI/5進(jìn)行了全基因組序列測定,并與GenBank中19株5型副流感病毒分離株基因組進(jìn)行比較分析,結(jié)果顯示:NL/CPI/5株全基因組長為15246個(gè)核苷酸(Nucleotides,nt),與20142017年在中國分離的CC-14、ZJQ-221、BC14和HeN0718四個(gè)CPIV毒株的全基因組核苷酸數(shù)量一致。NL/CPI/5株與2009年韓國分離毒株1168-1的核苷酸序列同源性最高,同源率為99.9%,與中國分離毒株ZJQ-221、CC-14、BC14和HeN0718株的核苷酸同源率較高,分別為99.8%、99.1%、99%和97.1%。NL/CPI/5株與ZJQ-221、CC-14、BC14和He... 

【文章來源】:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】:75 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

犬副流感弱毒疫苗株全基因組序列分析及基因組全長cDNA克隆質(zhì)粒、輔助質(zhì)粒的構(gòu)建


副粘病毒病毒粒子結(jié)構(gòu)示意圖(FieldsVirology,5thEdition)

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PIV5 常被稱為犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus,苗接種可有效預(yù)防犬副流感,而弱毒疫苗是目前使用最為廣泛的犬副了分析犬副流感弱毒疫苗株 NL/CPI/5 株與近幾年在中國及周邊國家IV 毒株在全基因組水平、主要抗原蛋白基因序列和氨基酸序列上的差異對 NL/CPI/5 株進(jìn)行全基因組序列測定,并與 GenBank 中 19 株 PIV5 及抗原蛋白基因序列和氨基酸序列進(jìn)行比較分析。試驗(yàn)材料病毒株P(guān)IV 弱毒株 NL/CPI/5 株由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所人獸共患團(tuán)隊(duì)保存,在 MDCK 細(xì)胞上擴(kuò)增、滴定后,-70℃凍存?zhèn)溆。質(zhì)粒粒 pBluscript Ⅱ KS(+/-)(CloNtech)由本實(shí)驗(yàn)室保存。

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圖 6 pBlueScript SK(+/-)載體多克隆位點(diǎn)圖Fig.6 pBlueScript SK(+/-) multiple cloNiNg site map共患與外來烈性病團(tuán)隊(duì)制作并保存;質(zhì)粒小提試劑盒(Plasmid Mini KitI)、膠回收試劑盒(Gel Extraction Kit)購自 OMEGAbio-tek 公司;RNA 提取試劑盒(RNeasyMini Kit)、莫洛尼氏鼠白血病逆轉(zhuǎn)錄酶(M-MLV RT)購自 Invitrogen 公司。2.1.4 儀器本實(shí)驗(yàn)用到主要儀器如下:雙層空氣恒溫域(WEALTEC 公司);生物安全柜、-70℃超低溫冰箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、小型高速離心機(jī)(Thermo 公司);潔凈工作臺(北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司);電子天平、全自動制冰機(jī)(HOSHIZAKI 公司);三槽 PCR 儀(SENAQUEST 公司);電泳儀(北京六一生物科技有限公司);紫外凝膠成像系統(tǒng)(北京賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司);微量移液器(Eppendorf 公司);4℃冰箱(海爾公司);DK-8D 型電熱恒溫水槽(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);恒溫振蕩器(CRYSTAL 公司);隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);微波爐(Galanz 公司);磁力攪拌器(上海梅穎浦儀器儀表制造有限公司)。

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]犬副流感流行毒株的分離與鑒定[J]. 金昌德,李六金,施新猷,師長宏,趙世君.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2000(06)

博士論文
[1]犬副流感病毒進(jìn)化分析及核酸疫苗和犬腺病毒重組疫苗的研究[D]. 閆喜軍.吉林大學(xué) 2007



本文編號:2981274

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