本實(shí)驗(yàn)以探索抗苗勒管激素（anti-Mullerian hormone, AMH），卵泡刺激素受體（follicle-stimulatinghormone receptor，F(xiàn)SHR）、黃體生成素受體（luteinizing hormone receptor，LHR）與卵泡發(fā)育相關(guān)基因在成年羊及羔羊卵巢中的定位及表達(dá)特征，以了解這些基因在綿羊卵泡發(fā)育的作用。本文通過分子克隆，RT-PCR定量分析及免疫組織化學(xué)等方法，對比分析AMH、FSHR和LHR在羔羊和成年羊卵巢卵泡中的表達(dá)模式，探討這些基因在綿羊卵泡發(fā)育中的調(diào)控機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分為以下四部分：1綿羊AMH基因的克隆、序列分析與原核表達(dá)以綿羊卵泡顆粒細(xì)胞為材料，提取總RNA，運(yùn)用同源序列克隆技術(shù)，對綿羊AMH基因的cDNA全長進(jìn)行克隆及序列分析。根據(jù)預(yù)測AMH蛋白序列將其氨基末端編碼260個氨基酸序列亞克隆至pET15b構(gòu)建原核表達(dá)載體，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)重組表達(dá)及鑒定。結(jié)果表明：獲得綿羊AMH基因cDNA全長1797bp（Genbank No. KC986978），開放閱讀框?yàn)?728bp，預(yù)測編碼575個氨基酸，N端24個氨基酸為信號肽序... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

綿羊AMH的RT-PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖

綿羊卵泡發(fā)育中 AMH、FSHR、LHR 基因的表達(dá)特征分析綿羊 AMH 前體蛋白與牛，豬，人和小鼠的同源性分別為 95.80%，77.60 %，75.90 %，66.60 %，而與斑馬魚的同源性僅為 18%（圖 1-4）。在各物種的 AMH 氨基酸序列中 N末端序列變異很大，而 C 末端氨基酸高度保守，其中 7 個半胱氨酸嚴(yán)格保守（圖 1-3）。

圖 1-3 綿羊、牛、豬、人、鼠、袋鼠、鱷魚、雞和斑馬魚 AMH 氨基酸序列的比對分析Fig. 1-3 Alignment of the deduced amino acid sequences ofAMH in ovine, cattle, pig, human, mouswallaby, alligator, chichen, and zebrafish：其中 N 末端的信號肽和 C 末端的序列均有箭頭標(biāo)識。潛在的活性激活位點(diǎn)均由文本框標(biāo)識。TGFβ區(qū)域由陰，7 個保守的半胱氨酸加框顯示。氨基酸的相似性由星點(diǎn)標(biāo)識（：=高度相似，.=低度相似，*=完全一致）。te: The signal peptide sequence and the beginning of the N- and C-terminal domain for AMH in ovine are shownows. The peptide cleavage site in human as well as potential cleavage sites for AMH in other species are boxed and de TGF-β domain is grey-shaded and the 7 conserved cysteines of this domain are boxed. Identical and similar amino marked by asterisk and dots (: = strong score, . = weak score according to comparison matrix Gonnet Pampectively).

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]快速石蠟切片法在免疫組化染色中的應(yīng)用[J]. 張偉,周永梅,陳明城,王蔚.  中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2011(04)
[2]超數(shù)排卵效果不同綿羊卵巢卵泡促卵泡素受體的分布[J]. 倪和民,張鴻波,劉云海,蘆天罡,鄧桂馨,郭勇.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(06)
[3]誘導(dǎo)幼羔卵泡發(fā)育及體外胚胎生產(chǎn)[J]. 陳曉勇,田樹軍,桑潤滋,孫樹春,趙駐軍,李俊杰,敦偉濤.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2008(03)
[4]哺乳動物卵泡閉鎖的研究[J]. 丁愛軍,蘇雷.  中國畜禽種業(yè). 2007(06)
[5]關(guān)于石蠟切片在染色中脫蠟的探討[J]. 榮瑋,劉海燕.  解剖學(xué)雜志. 2006(01)
[6]顆粒細(xì)胞的增殖分化及其在卵泡發(fā)育中的作用[J]. 盧翠玲,楊巍,胡召元,劉以訓(xùn).  科學(xué)通報(bào). 2005(21)
[7]卵泡生長、分化和閉鎖的調(diào)控[J]. 金萱,劉以訓(xùn).  科學(xué)通報(bào). 2003(14)
[8]煮沸法在石蠟切片抗原修復(fù)中應(yīng)用的探討[J]. 任學(xué)軍,江昌新.  天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2001(01)



本文編號：2981215