包蟲病是由中絳期細粒棘球絳蟲引起的,該病在全球范圍內(nèi)均有分布,我國是該病高發(fā)的國家和地區(qū)之一。該病危害性大,患者10年病死率高達94%。防控措施以吡喹酮犬犬投藥月月驅(qū)蟲為主,盡管有效,但是在基層難以長期堅持,而且流浪狗難以管理;針對中間宿主的EG95疫苗對移行期內(nèi)的病原防控有效,但是終末宿主與中間宿主數(shù)量比達到45:1,防控成本很高;因此,建立針對終末宿主有效的免疫預防方法是防控該病的一致研究方向。國內(nèi)外研究表明,四跨膜蛋白家族（TSP）在寄生蟲的研究中具有很好的免疫原價值,因此,本試驗針對Eg-TSP14和Eg-TSP33進行了克隆、原核表達以及免疫原性初步研究,以期為Eg-TSP14和Eg-TSP33是否具有作為疫苗候選抗原的潛力提供理論基礎(chǔ)。目的:克隆Eg-TSP14以及Eg-TSP33基因,并構(gòu)建重組pET-32a-TSP14以及pET-32a-TSP33質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進行原核表達,并將重組蛋白免疫小鼠對其免疫原性進行初步研究。方法:（1）以細粒棘球絳蟲成蟲、原頭蚴和包囊壁的cDNA為模板,利用熒光定量PCR技術(shù)進行擴增,分析兩個基因在蟲體不同發(fā)育階段的差異表達情況。（... 

【文章來源】：石河子大學新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SOPMA預測Eg-TSP14二級結(jié)構(gòu)

20通過SWISS-MODEL軟件對Eg-TSP14以及Eg-TSP33的三級結(jié)構(gòu)進行預測分析，結(jié)果顯示Eg-TSP14以及Eg-TSP33的三級結(jié)構(gòu)如圖所示。3.4Eg-TSP14以及Eg-TSP33結(jié)構(gòu)域分析用DOMAIN軟件對Eg-TSP14以及Eg-TSP33的結(jié)構(gòu)域進行分析，結(jié)果顯示，Eg-TSP14以及Eg-TSP33含有四個跨膜結(jié)構(gòu)域：小外環(huán)（EC1），較大的外環(huán)（EC2），小內(nèi)環(huán)（IL）和短的細胞質(zhì)尾。它們包括4-6個保守的細胞外半胱氨酸殘基和跨膜結(jié)構(gòu)域內(nèi)的極性殘基。Eg-TSP14LEL結(jié)構(gòu)位于77-187位氨基酸，Eg-TSP33LEL結(jié)構(gòu)位于103-227位氨基酸，包括了CCG序列。用TMHMM對Eg-TSP14以及Eg-TSP33跨膜區(qū)進行分析，結(jié)果顯示，Eg-TSP14圖2-1SOPMA預測Eg-TSP14二級結(jié)構(gòu)Fig2-1SOPMApredictionofEg-TSP14secondarystructure圖2-2SOPMA預測Eg-TSP33二級結(jié)構(gòu)Fig2-2SOPMApredictionofEg-TSP33secondarystructure圖2-4SWISS-MODEL預測Eg-TSP33三級結(jié)構(gòu)Fig2-4SWISS-MODELpredictionofEg-TSP33tertiarystructure圖2-3SWISS-MODEL預測Eg-TSP14三級結(jié)構(gòu)Fig2-3SWISS-MODELpredictionofEg-TSP14tertiarystructure

20通過SWISS-MODEL軟件對Eg-TSP14以及Eg-TSP33的三級結(jié)構(gòu)進行預測分析，結(jié)果顯示Eg-TSP14以及Eg-TSP33的三級結(jié)構(gòu)如圖所示。3.4Eg-TSP14以及Eg-TSP33結(jié)構(gòu)域分析用DOMAIN軟件對Eg-TSP14以及Eg-TSP33的結(jié)構(gòu)域進行分析，結(jié)果顯示，Eg-TSP14以及Eg-TSP33含有四個跨膜結(jié)構(gòu)域：小外環(huán)（EC1），較大的外環(huán)（EC2），小內(nèi)環(huán)（IL）和短的細胞質(zhì)尾。它們包括4-6個保守的細胞外半胱氨酸殘基和跨膜結(jié)構(gòu)域內(nèi)的極性殘基。Eg-TSP14LEL結(jié)構(gòu)位于77-187位氨基酸，Eg-TSP33LEL結(jié)構(gòu)位于103-227位氨基酸，包括了CCG序列。用TMHMM對Eg-TSP14以及Eg-TSP33跨膜區(qū)進行分析，結(jié)果顯示，Eg-TSP14圖2-1SOPMA預測Eg-TSP14二級結(jié)構(gòu)Fig2-1SOPMApredictionofEg-TSP14secondarystructure圖2-2SOPMA預測Eg-TSP33二級結(jié)構(gòu)Fig2-2SOPMApredictionofEg-TSP33secondarystructure圖2-4SWISS-MODEL預測Eg-TSP33三級結(jié)構(gòu)Fig2-4SWISS-MODELpredictionofEg-TSP33tertiarystructure圖2-3SWISS-MODEL預測Eg-TSP14三級結(jié)構(gòu)Fig2-3SWISS-MODELpredictionofEg-TSP14tertiarystructure

【參考文獻】：
期刊論文
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[10]包蟲病的流行因素及防治分析[J]. 劉進.  當代畜牧. 2016(05)

碩士論文
[1]犬細粒棘球絳蟲EdiagA864單克隆抗體的制備及初步應用[D]. 劉原源.吉林大學 2015
[2]日本血吸蟲重組SjTsp2/Sj29表膜蛋白疫苗對小鼠免疫效果的研究[D]. 雷娜.安徽醫(yī)科大學 2014



本文編號：2978909