AdipoR1基因是骨骼肌中表達(dá)豐度最高且與球狀脂聯(lián)素親和力最強(qiáng)的細(xì)胞因子,主要介導(dǎo)球狀脂聯(lián)素參與糖類和脂質(zhì)代謝,維持機(jī)體穩(wěn)態(tài),與體內(nèi)脂肪累積呈負(fù)相關(guān),與胰島素抗性、抗動脈粥樣硬化等免疫反應(yīng)直接或間接相關(guān)。AdipoR1基因在組織中表達(dá)的高低直接決定脂聯(lián)素基因在相關(guān)組織中發(fā)揮生理功能的作用強(qiáng)度。miRNAs是一類來源于染色體非編碼區(qū)大小為20nt左右的小RNA分子,其作用是在轉(zhuǎn)錄后水平上對靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控,主要是抑制靶基因的表達(dá)。miRNAs在動物的基因表達(dá)調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖和分化、細(xì)胞凋亡、機(jī)體癌癥防御等過程中發(fā)揮著重要的生理學(xué)功能。miRNAs尤其作為一種重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)解新陳代謝因子,參與機(jī)體能量的動態(tài)平衡,調(diào)節(jié)脂肪的分化。AdipoR1基因在鴨的各個組織中表達(dá)譜還未見詳細(xì)報(bào)道,鑒于AdipoR1介導(dǎo)的脂聯(lián)素與體脂累積呈負(fù)相關(guān),在治療肥胖的臨床醫(yī)學(xué)上有著十分中的意義,由此我們設(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn),檢測AdipoR1基因在鴨的組織表達(dá)譜和時空表達(dá)譜,同時探討miR-148a對鴨AdipoR1的調(diào)控作用。旨在為鴨的選育和脂肪累積的調(diào)控機(jī)理研究提供參考信息。采用Real-Time PC... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 脂聯(lián)素及AdipoR1
        1.1 脂聯(lián)素概述
        1.2 AdipoR1概述
        1.3 AdipoR1介導(dǎo)脂聯(lián)素發(fā)揮生物學(xué)功能
        1.4 AdipoR1的表達(dá)調(diào)控
    2 miRNA的特征及生物學(xué)功能
        2.1 miRNA的形成
        2.2 miRNA的特征
        2.3 miRNA的生物過程
        2.4 miRNA的生物學(xué)功能
    3 miRNA靶標(biāo)預(yù)測與驗(yàn)證方法
        3.1 生物信息學(xué)進(jìn)行miRNA靶標(biāo)預(yù)測
        3.2 靶標(biāo)基因驗(yàn)證的生物學(xué)方法
        3.3 miR-148a的研究進(jìn)展
    4 本研究的目的和意義
    參考文獻(xiàn)
第二章 AdipoR1在不同品種鴨不同組織中時空表達(dá)譜分析
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動物及樣品采集
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 主要溶液及其配置
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 引物的設(shè)計(jì)
        2.2 組織樣品總RNA的提取
        2.3 總RNA濃度和純度檢測
        2.4 cDNA的獲得
        2.5 鴨AdipoR1基因定量引物特異擴(kuò)增
        2.6 Real-time PCR
        2.7 數(shù)據(jù)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 總RNA質(zhì)量檢測
        3.2 cDNA質(zhì)量檢測
        3.3 鴨AdipoR1熒光定量引物驗(yàn)證
        3.4 AdipoR1基因在不同品種鴨各組織時空表達(dá)譜
    4 討論
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 miR-148a對鴨AdipoR1基因調(diào)控機(jī)制的研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞、菌株和質(zhì)粒
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 主要溶液及其配置
        1.5 生物學(xué)工具
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 引物的設(shè)計(jì)
        2.2 組織樣RNA的提取
        2.3 鴨AdipoR1-3'UTR序列的擴(kuò)增
        2.4 鴨AdipoR1基因的生物學(xué)信息學(xué)分析
        2.5 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.6 鴨骨骼肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.6.1 細(xì)胞鋪板
            2.6.2 miR-148a轉(zhuǎn)染
            2.6.3 轉(zhuǎn)染效率的觀察
        2.7 Real-time PCR和Western blot
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 組織樣總RNA的提取
        3.2 AdipoR1-3'UTR的擴(kuò)增
        3.3 陽性克隆與測序
        3.4 生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)果
        3.5 鴨骨骼肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.6 Real-time PCR和Western blot結(jié)果
    4 討論
        4.1 關(guān)于AdipoR1基因在骨骼肌中作用
        4.2 關(guān)于鴨骨骼肌的分離
        4.3 關(guān)于miRNA與脂肪代謝
        4.4 關(guān)于miR-148a與鴨AdipoR1基因在骨骼肌中的關(guān)系
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
全文創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
附錄
攻讀碩士期間發(fā)表的論文



本文編號：2974923