湖羊是我國(guó)著名的多羔綿羊品種兼羔皮用綿羊品種。近年來(lái),由于人們對(duì)湖羊肉用性能的重視,以及產(chǎn)區(qū)外部分外來(lái)品種的引入,導(dǎo)致湖羊羔皮品質(zhì)逐漸下降。毛囊是由20多種細(xì)胞構(gòu)成的皮膚附屬器官,其中毛乳頭細(xì)胞在毛囊生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。microRNAs（miRNAs）是一類長(zhǎng)約18-24nt,在轉(zhuǎn)錄后水平介導(dǎo)基因沉默的短單鏈非編碼RNA。研究表明,大量miRNAs參與毛囊的發(fā)生發(fā)育和周期性生長(zhǎng)。本研究以湖羊?yàn)檠芯繉?duì)象,通過(guò)機(jī)械分離法和酶消化法成功培養(yǎng)了湖羊羔皮毛囊毛乳頭細(xì)胞,并在課題組前期基因芯片和高通量測(cè)序結(jié)果的基礎(chǔ)上,以在湖羊不同花紋羔皮毛囊中呈現(xiàn)差異表達(dá)的BMP7基因?yàn)檠芯烤�索,利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)并篩選出靶向BMP7的miRNAs,并與本課題組前期進(jìn)行的湖羊不同花紋羔皮毛囊的miRNA測(cè)序數(shù)據(jù)取交集得到miR-148a和miR-10a,通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)、Western Blot和RT-qPCR技術(shù)驗(yàn)證其靶向關(guān)系,最后利用CCK-8和RT-qPCR檢測(cè)miR-148a和miR-10a對(duì)湖羊毛乳頭細(xì)胞增殖以及與毛囊相關(guān)信號(hào)通路（TGF-β/Smads 通路）中部分基因（Sma... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１毛囊的結(jié)構(gòu)圖［１３］??Ｆｉｇ．?１－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｈａｉｒ?ｆｏｌｌｉｃｌｅ＾１３】??

、官形成、肌肉生長(zhǎng)發(fā)育、脂肪代謝以及機(jī)體的免疫應(yīng)答等反應(yīng)１４５］。１９９３年，秀麗隱桿線蟲中發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)ｍｉＲＮＡ?（Ｈｎ－４），此后在人、鼠、羊等各種生ｍｉＲＮＡ被相繼發(fā)現(xiàn)并被鑒定。??ｍｉＲＮＡ同基因一樣，由ＤＮＡ轉(zhuǎn)錄形成。在細(xì)胞核內(nèi)，首先由ＲＮＡ聚合約幾百到數(shù)千個(gè)核苷酸且具有帽子結(jié)構(gòu)和多聚腺苷酸尾巴的初級(jí)ｍｉＲＮＡ（ＰｒｉＰｉｒ－ｍｉＲＮＡ），然后在Ｄｒｏｓｈａ酶和輔助因子的作用下，Ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ被切割為６ｍｉＲＮＡ?（Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ?ｍｉＲＮＡ），接著在?ＲＡＮ－ＧＴＰ?和輸出蛋白?５?ＣＥｘｐｏｒｔｉｎ?５）ｍｉＲＮＡ被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中，再由Ｄｉｃｅｒ內(nèi)切酶被加工成約２２?ｎｔ的不完善的（ｍｉＲＮＡ：?ｍｉＲＮＡｄｕｐｌｅｘ）。隨后，ｍｉＲＮＡ?經(jīng)解鏈形成成熟?ｍｉＲＮＡ?（ｍａｔｕｒｅｍｍｉＲＮＡ再與ＲＮＡ誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ?ｃｏｍｐｌｅｘ，ＲＩＳＣ與ｍｉＲＮＡ靶基因位點(diǎn)互補(bǔ)，從而能發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。ｍｉＲＮＡ與靶基因有兩一種是完全互補(bǔ)，則會(huì)造成ＲＩＳＣ破壞ｍＲＮＡ脫腺苷酸化后去帽，從而引［４７１；另一種為不完全互補(bǔ)，尤其是ｍｉＲＮＡ的５’端的第２－８?jìng)�(gè)堿基與ｍＲＮＡ結(jié)不會(huì)被ＲＩＳＣ降解，而是通過(guò)阻礙ｍＲＮＡ的轉(zhuǎn)錄來(lái)抑制其翻譯１４８〗。??

乳頭細(xì)胞的分離培養(yǎng)??離心法結(jié)合中性蛋白酶和ＩＶ型膠原酶消化法分離的湖羊毛乳頭觀察呈圓形或橢圓形。細(xì)胞分離培養(yǎng)的第２天可見(jiàn)細(xì)胞貼壁（％細(xì)胞貼壁，細(xì)胞增殖速度明顯加快，外觀呈長(zhǎng)三角形或多角形，（圖２－１?Ｂ）。毛乳頭細(xì)胞生長(zhǎng)至６天以后呈放射狀向四周生長(zhǎng)，的形狀，并形成致密區(qū)（圖２－１?Ｃ）。１２天細(xì)胞已逐漸融合成細(xì)呈放射狀向外生長(zhǎng)，中央?yún)^(qū)細(xì)胞出現(xiàn)多層化向上堆積，呈現(xiàn)出?Ｄ），當(dāng)湖羊毛乳頭細(xì)胞傳至２０代時(shí)仍保留這種凝集性生長(zhǎng)的乳頭細(xì)胞培養(yǎng)至１５天可進(jìn)行首次傳代，隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增逐漸縮小。待湖羊毛乳頭細(xì)胞生長(zhǎng)趨于穩(wěn)定后，培養(yǎng)３－４天的８０－９０％并可進(jìn)行傳代。與此同時(shí)，隨著傳代次數(shù)的增加，毛乳類似成纖維細(xì)胞，但胞體比成纖維細(xì)胞體胞大，且呈漩渦狀生Ａ?Ｂ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]內(nèi)蒙古絨山羊皮膚毛囊毛乳頭細(xì)胞系的建立及其基因表達(dá)譜型的研究[D]. 朱兵.內(nèi)蒙古大學(xué) 2014
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碩士論文
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[3]IGF-1、FGF7與毛乳頭細(xì)胞生物學(xué)特性的相關(guān)性及復(fù)方甘草酸苷、地塞米松對(duì)毛乳頭細(xì)胞活性影響的研究[D]. 程毅.河北醫(yī)科大學(xué) 2010
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本文編號(hào)：2971023