PD-1（programmed death1, PD-1）最初是從T細(xì)胞中克隆出來的，是CD28家族的一個(gè)成員，主要在活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞和單核細(xì)胞上表達(dá)，有PD-L1和PD-L2兩個(gè)配體。PD-1及其配體相互作用致使效性T細(xì)胞的功能抑制，在阻斷PD-1/PD-L1通路后，可使功能耗竭的T細(xì)胞功能恢復(fù)。有研究表明，PD-1的表達(dá)量與疾病的進(jìn)程有關(guān)，且在阻斷PD-1/PD-L1通路后可治療持續(xù)性病毒感染。但是，由于缺乏原材料，在豬病中對(duì)PD-1/PD-L1通路的研究較少。本研究以豬PD-1及PD-L1為研究對(duì)象，通過克隆、原核表達(dá)獲得正確表達(dá)的PD-1及PD-L1胞外區(qū)蛋白，為研究PD-1/PD-L1通路在豬病的作用提供原材料。本研究根據(jù)GenBank中豬PD-1和PD-L1的基因序列及原核表達(dá)載體多克隆酶切位點(diǎn)，設(shè)計(jì)其胞外區(qū)引物，以豬外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的cDNA為模板，應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增PD-1、PD-L1胞外區(qū)片段，并與pMD18-T-simple載體連接，構(gòu)建pMD-PD1、pMD-PDL1重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化至DH5α中通過菌液PCR篩選陽性克隆并測(cè)序，利用限制性內(nèi)切酶Eco... 

【文章來源】：河南科技學(xué)院河南省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CD28家族成員及其配體簡(jiǎn)圖

第一章文獻(xiàn)綜述PD-1 及其配體 PD-Ls 的晶體結(jié)構(gòu)（圖 2）[12-13]。CTLA-4IgV 區(qū)的鏈?zhǔn)杷蛄?MYPPY與 B7-1 和 B7-2 結(jié)合，而 PD-1 是以前β面（AGFCC’β鏈）與 PD-L1（AGFCC’）或 PD-L2（AGFC）的β面相互作用并結(jié)合。PD-1 與 PD-Ls 的這種面對(duì)面的作用，使二者的連接區(qū)域比 CTLA-4/B7s 的作用面大，且使所形成的 PD-1/PD-Ls 復(fù)合物更加牢固。

最后透析到 PBS 溶液蛋白的濃度。er 公司的紫外分光光度計(jì) D0 nm 測(cè)定樣品 A260和 A280A260)×稀釋倍數(shù)，計(jì)算出所外區(qū)基因片段的克隆D-1、PD-L1 胞外區(qū)基因片擴(kuò)增出大小約為 366 bp 和圖 2-2。M 1 2p

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]B7-H1 expression is associated with expansion of regulatory T cells in colorectal carcinoma[J]. Dong Hua,Yong Mao,Department of Oncology,the Fourth Affiliated Hospital of Suzhou University,Wuxi 214062,Jiangsu Province,China Yu-Yu Wu,Department of Pathology,The Fourth Affiliated Hospital of Soochow University,Wuxi 214062,Jiangsu Province,China Jing Sun,Yong Mao,Xue-Guang Zhang,Institute of Medical Biotechnology,Soochow University,Suzhou 215007,Jiangsu Province,China Lu-Jun Chen,Clinical central Laboratory,The Third Affiliated Hospital of Soochow University,Changzhou 213003,Jiangsu Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(09)



本文編號(hào)：2970890