豬鏈球菌（Streptococcus suis,SS）能引起包括人和豬在內(nèi)的多種疾病,是一種重要的人獸共患病病原菌,嚴重危害公共安全衛(wèi)生。根據(jù)莢膜多糖抗原性的差異,將豬鏈球菌分為35個血清型,其中豬鏈球菌2型（SS2）分布最廣且毒力最強。SS引起的豬鏈球菌病在世界范圍內(nèi)均有分布,近年來,SS2引起的病癥在我國爆發(fā)了2次,造成人員傷亡和巨大的經(jīng)濟損失。目前SS2受到世界范圍內(nèi)的廣泛關注,陸續(xù)報到了多種該菌的毒力因子,但其致病機理仍不清楚。本研究通過比較基因組學的方法,比較強毒株ZY05719和弱毒株T15的差異基因,找出ZY05719中有而T15中無的基因,這些差異基因可能與強毒株的毒力相關。從中篩選出Dbp基因并以此為研究對象,通過構建缺失突變株以及比較生物學特性,對Dbp在SS2致病過程中所起的作用進行研究,豐富了對該菌致病機理的認識。1豬鏈球菌2型強毒株ZY05719和弱毒株T15的基因組比較分析及Dbp基因在豬鏈球菌中的分布本實驗用比較基因組學的方法,通過mauve軟件比較弱毒株T15和強毒株ZY05719的差異基因,篩選出ZY05719中有而T15中無的基因,一共92個基因片段... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻綜述
    第一章 豬鏈球菌2型主要毒力因子及致病機理
        1 豬鏈球菌2型毒力因子的研究進展
            1.1 莢膜多糖（Capsular polysaccharide,CPS）
            1.2 豬溶血素（Suilysin,SLY）
            1.3 溶菌酶釋放蛋白（muramidase-released protein,MRP）和胞外因子（extracellularfactor,EF）
            1.4 血清渾濁因子（Opacity-factor of serum,OFS）
            1.5 分選酶（Sortases,SRT）
            1.6 丙氨酰酶A（D-alanylationA,DltA）
            1.7 纖連蛋白和纖連蛋白結合蛋白（Fibronectin-and fibrinogen-binding protein of S.suis,FBPS）
            1.8 3-磷酸甘油醛脫氫酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）
            1.9 豬鏈球菌烯醇化酶（SsEno）
            1.10 SalK和SalR二元調(diào)控基因
            1.11 酶類（enzyme）
        2 豬鏈球菌2型致病機理的研究
            2.1 粘附和侵襲機制
            2.2 SS2在血液中存活和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的入侵
        參考文獻
第二篇 試驗研究
    第二章 豬鏈球菌2型強毒株和弱毒株的基因組比較分析及DBP基因在豬鏈球菌中的分布
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株和質粒
                1.1.2 試劑與儀器
            1.2 序列分析
            1.3 細菌總RNA提取
                1.3.1 采用Trizolz法提取ZY05719菌株總RNA
                1.3.2 cDNA的合成
                1.3.3 qRT-PCR對Dbp基因的表達分析
            1.4 細菌基因組的提取
            1.5 Dbp基因在SS中分布檢測
        2 試驗結果
            2.1 序列分析
            2.2 Dbp基因的表達分析
            2.3 Dbp基因分布檢測
        3 討論
        參考文獻
        Abstract
    第三章 豬鏈球菌2型DBP基因缺失株的構建
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株、質粒
                1.1.2 試劑和儀器
            1.2 細菌的培養(yǎng)
            1.3 細菌基因組的提取
            1.4 引物設計
            1.5 基因缺失載體構建
                1.5.1 PCR
                1.5.2 瓊脂糖凝膠電泳
                1.5.3 PCR擴增產(chǎn)物回收
                1.5.4 融合PCR
                1.5.5 融合PCR產(chǎn)物回收
                1.5.6 自殺性質粒pSET4S的提取
                1.5.7 目的片段的酶切、連接
                1.5.8 制備DH5α感受態(tài)細胞
                1.5.9 連接產(chǎn)物的轉化及鑒定
            1.6 基因缺失株的構建
                1.6.1 感受態(tài)細胞的制備
                1.6.2 電轉化
                1.6.3 缺失株（ΔDbp）的篩選及鑒定
        2 結果
            2.1 基因缺失質粒的構建
            2.2 缺失株（ΔDbp）的鑒定
        3 討論
        參考文獻
        abstracts
    第四章 豬鏈球菌2型DBP基因缺失株的生物學特性及致病性分析
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌種及試驗動物
                1.1.2 主要儀器及試劑
            1.2 生長特性分析
            1.3 形態(tài)學比較
            1.4 斑馬魚毒力試驗
        2 結果
            2.1 形態(tài)學比較
            2.2 生長特性分析
            2.3 斑馬魚毒力試驗
        3 討論
        參考文獻
        Abstracts
    第五章 Dbp基因的克隆表達及其免疫反應性分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
                1.1.1 菌株和試驗動物
                1.1.2 主要試劑和儀器
            1.2 血清制備
            1.3 重組質粒的構建與鑒定
                1.3.1 重組質粒的構建
                1.3.2 重組質粒的轉化
                1.3.3 重組質粒的鑒定
            1.4 重組質粒的誘導表達
            1.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）
            1.6 免疫轉印
        2 結果
            2.1 重組表達質粒的鑒定
            2.2 誘導表達
            2.3 免疫轉印
        3 討論
        參考文獻
        Abstract
全文總結
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]2型豬鏈球菌雙組分調(diào)控系統(tǒng)SalK/SalR抗吞噬機制的初步研究[J]. 付忠琳,駢亞亞,李雪琴,鄭玉玲,馬世良,袁媛,霍春月.  細胞與分子免疫學雜志. 2013(06)



本文編號：2970079