隨著小鼠和人誘導性多能干細胞（iPSCs）細胞系的建立，已有多項研究表明利用這種新興的體細胞重編程技術(shù)在許多物種都獲得了成功。iPSCs技術(shù)相對容易操作，重復性好，且能夠避免由胚胎干細胞（Embryonic stem cells，ES）帶來的倫理道德問題，因而具有良好的研究前景和應用價值。作為哺乳動物，豬與人類在器官形態(tài)、大小、功能等方面均具有相似的生理指標。對于豬胚胎干細胞（pESCs）的研究已有二十年的歷史，然而由于對譜系決定因子及豬早期胚胎發(fā)育的調(diào)控機制所知甚少，單純的照搬嚙齒類及靈長類動物的ES建立方法，并不完全適用于豬這個品系。因而目前，尚未建立起純系的豬ES系。而大鼠iPSCs的成功獲取，是在未成功建立ES細胞系之前利用iPSCs技術(shù)建立多能干細胞系的成功范例，這將干細胞領(lǐng)域的研究帶到了一個嶄新的時代。本研究選用豬胎兒成纖維細胞作為供體細胞，通過逆轉(zhuǎn)錄病毒介導鼠源Oct4，Sox2，Klf4及c-Myc（OSKM）四個調(diào)控因子，優(yōu)化培養(yǎng)條件進行誘導重編程，成功建立豬誘導性多潛能干細胞（piPSCs）系，通過檢測所得piPSCs不僅具有多潛能基因的表達，體外形成擬胚體的能力，... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

microRNAs對ESC的調(diào)控機制[80]

逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝Fig1.2PackageofretroviruscontainingGFPin293GP

圖 1.3 PFF 重編程為 piPSCs 過程中的形態(tài)變化（A:D0，B:D9，C:D14）Fig 1.3 Alteration of the morphology during PFF reprogramming1.3.2 豬 iPSCs 鑒定挑取單克隆在新的飼養(yǎng)層細胞上進行擴大培養(yǎng)進行進一步鑒定。首先，對其進行堿性磷酸酶（AP）染色，結(jié)果顯示所得克隆均為陽性（圖 1.4）。提取piPSCs 總 RNA，通過半定量 PCR 檢測內(nèi)外源多能基因表達情況，結(jié)果顯示piPSCs 內(nèi)源性多能基因 Sox2、Oct4、Nanog 和 Lin28 均被激活（圖 1.5）。利用SSEA-1、OCT4、SOX2 和 NANOG 幾種抗體對克隆進行免疫熒光染色，結(jié)果均為陽性（圖 1.6）。


本文編號：2968258