為建立B型流感病毒（IBV）快速診斷方法,本研究采用真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化了IBV中高度保守的核糖核蛋白（NP）,以其為抗原,免疫小鼠制備IBV NP蛋白單克隆抗體（MAb）,選取抗原表位長(zhǎng)、特異性強(qiáng)的MAb2B3-5作為捕獲抗體,選取抗原表位短、靈敏度高的MAb 3C3-7經(jīng)HRP標(biāo)記后作為檢測(cè)抗體,經(jīng)條件優(yōu)化,建立了檢測(cè)IBV NP蛋白的雙MAb夾心ELISA檢測(cè)方法。結(jié)果顯示,該檢測(cè)方法捕獲抗體包被量為每孔100 ng,檢測(cè)抗體使用量為每孔20 ng,NP蛋白濃度在3.9 ng/mL～62.5 ng/mL時(shí)與OD_450nm呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2>0.99。利用該ELISA方法對(duì)多種病毒進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示該方法僅能與IBV發(fā)生反應(yīng),表明該方法特異性強(qiáng);靈敏度試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法對(duì)病毒NP蛋白的最低檢測(cè)限為13.26 ng/mL,敏感性高;批內(nèi)和批間重復(fù)性變異系數(shù)均小于8%,重復(fù)性好;捕獲抗體可在25℃和37℃保存4 d,熱穩(wěn)定性好。利用本實(shí)驗(yàn)建立的ELISA方法和qPCR方法對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保存的40份人咽拭子進(jìn)行檢測(cè),該方法與qPCR方法相比符合率為... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,42(08)北大核心

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圖22株MAbs抗原表位的westernblot鑒定結(jié)果Fig.2WesternblotidentificationofMAbsepitopesin2trains2B3-51:pCAGGS-GST-IBVYmPJ18NPmut1;2:pCAGGS-GST-IBVYmPJ18NPmut2


本文編號(hào)：2966060