禽流感（avian influenza,AI）由正粘病毒科A型流感病毒引起的全身性傳染病,國際獸疫局（OIE）將其定為A類傳染病,不僅嚴重危害養(yǎng)禽業(yè),而且給公共衛(wèi)生造成巨大威脅,因此國家將防治禽流感作為重要任務(wù)。目前,對禽流感的主要檢測技術(shù)有血凝-血凝抑制（HA-HI）試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）和膠體金等方法。前者比較敏感,但受外界因素影響較大而削弱了其實用價值;ELISA適合于大批量血清學調(diào)查,但因其條件要求高,現(xiàn)場操作不便;PCR雖然可直接檢出病毒的基因,但所需的設(shè)備昂貴,在臨床檢測方面受到了很大的限制;膠體金方法目前國內(nèi)、外均有相關(guān)的產(chǎn)品問世,但其檢測靈敏度不高,只能定性,不能定量,該方法只能用于疫病診斷的輔助檢測。因此探索高效、特異、準確的檢測手段對于禽流感的防控具有十分重要的意義�，F(xiàn)有的禽流感血清學檢測技術(shù)主要利用抗原抗體的反應(yīng),而目前國內(nèi)禽流感病毒抗體產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊,國外已有比較成熟的商品化抗體,抗體試劑主要依賴于進口,但價格較昂貴。制備高效價、低成本、特異性強的單克隆抗體可為禽流感的防控提供必備的試劑原料。極大角度光纖光柵（exces... 

【文章來源】：重慶理工大學重慶市

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

AIV病毒結(jié)構(gòu)圖

圖 2.1 pET28a（+）/HA 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定M1-M2: DNA 分子質(zhì)量標準；1-2: pET28a(+)/HA 雙酶切產(chǎn)物Fig.2.1 Double enzyme digestion of pET28a (+) /HA recombinant plasmiM1-M2: DNA marker; 1-2: pET28a (+)/HA double enzyme digestion produc質(zhì)粒的可溶性表達驗證T28a(+)/HA 工程菌按照相關(guān)技術(shù)要求進行試表達，采用文獻資進行誘導表達后，將菌體超聲波裂菌，離心取上清，將沉淀混PAGE 檢測。結(jié)果表明，發(fā)現(xiàn)在 70KD 處有明顯的蛋白條帶，帶，而且在 IPTG 為 0.5mmol/L 誘導 8h 時所試所有溫度下上，為可溶性表達，結(jié)果如圖 2.2 所示。

圖 2.2 HA 重組蛋白 SDS-PAGE 分析質(zhì)分子質(zhì)量標準；1: pET28a(+)空載體；2. 20℃上清；3. 20℃沉淀；4. 25℃上清沉淀；6. 30℃上清；7. 30℃沉淀；8. 37℃上清；9. 37℃沉淀；Fig.2.2 Analysis of recombinant HA protein by SDS-PAGE: Protein molecular marker; 1: pET28a(+) vector；2: Expresse supernatant 20 ℃; 3ecipitation 20 ℃; 4: Expresse supernatant 25 ℃; 5: Express precipitation 25 ℃; 6: upernatant 30 ℃; 7: Express precipitation 30 ℃; 8: Expresse supernatant 37 ℃; 9: precipitation 37℃;選重組菌株最佳誘導條件要影響蛋白表達三組因素，利用控制變量實驗法對誘導溫度、誘導誘導時間做逐次篩查，探索出 HA 重組蛋白的最佳誘導條件為 30mol/L，誘導時間 10h 。）加入適量的 1mmol/LIPTG，將 4 支試管分別放置于 20℃、25℃、

【參考文獻】：
期刊論文
[1]H5亞型流感病毒HA頭部球狀結(jié)構(gòu)域在畢赤酵母中的高效表達及其免疫原性分析[J]. 范文輝,王萌,劉麗蓉,張鶴,張爽,凌紅麗,劉文軍,李晶.  生物工程學報. 2019(01)
[2]逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導等溫擴增技術(shù)檢測H7N9禽流感病毒基因[J]. 張錦海,陳文琦,韓一芳,張琪,葉福強,王太武,陳樂如,王長軍.  東南國防醫(yī)藥. 2019(01)
[3]禽流感病毒H7亞型競爭ELISA抗體檢測方法的建立[J]. 范俊青,魏燕鳴,鄒忠,李冉,孫小美,金梅林.  養(yǎng)殖與飼料. 2019(01)
[4]氧化石墨烯的制備及其在生物傳感器中的應(yīng)用進展[J]. 裴新月,樊璨,王詩.  湖北科技學院學報(醫(yī)學版). 2018(06)
[5]H5N8亞型流感病毒雙重實時熒光RT-PCR檢測方法的建立與評價[J]. 孫潔,廖立珊,于力,吳紹精,劉建利,陶虹,楊俊興,曾少靈,林彥星,黃超華,林慶燕,秦智鋒.  上海畜牧獸醫(yī)通訊. 2018(06)
[6]45°傾斜光纖光柵波長可調(diào)諧調(diào)Q光纖激光器[J]. 胡嘯林,閆志君,黃千千,鄒傳杭,王天行,牟成博.  光電工程. 2018(10)
[7]基于45°傾斜光柵的重復頻率可切換被動諧波鎖模光纖激光器[J]. 凌遠達,黃千千,鄒傳杭,閆志君,牟成博.  紅外與激光工程. 2018(08)
[8]傾斜光纖光柵傳感器[J]. 郭團,劉甫,邵理陽.  應(yīng)用科學學報. 2018(01)
[9]流感病毒M1與NA蛋白的相互作用及其在病毒出芽中的作用[J]. 包旦奇,侯天龍,李澤君,劉芹防,張七斤.  中國動物傳染病學報. 2017(05)
[10]一種基于液相基因芯片技術(shù)對甲型和乙型流感病毒分型檢測方法的建立[J]. 陳錦龍,呂剛,張優(yōu),符瑞佳,尹飛飛.  分子診斷與治療雜志. 2017(05)

博士論文
[1]基于氧化石墨烯的光學生化傳感檢測研究[D]. 張倩.浙江大學 2017

碩士論文
[1]傾斜光纖光柵的譜特性與折射率傳感特性研究[D]. 高久鵬.南京郵電大學 2017
[2]基于81°傾斜光柵的光纖傳感器理論和實驗的研究[D]. 舒慧.電子科技大學 2016
[3]常見流感病毒分型基因芯片檢測方法的建立和應(yīng)用[D]. 王斗.北京工業(yè)大學 2013



本文編號：2965300