發(fā)布時(shí)間：2021-01-08 21:08

　　禽流感（avian influenza,AI）由正粘病毒科A型流感病毒引起的全身性傳染病,國際獸疫局（OIE）將其定為A類傳染病,不僅嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè),而且給公共衛(wèi)生造成巨大威脅,因此國家將防治禽流感作為重要任務(wù)。目前,對禽流感的主要檢測技術(shù)有血凝-血凝抑制（HA-HI）試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和膠體金等方法。前者比較敏感,但受外界因素影響較大而削弱了其實(shí)用價(jià)值;ELISA適合于大批量血清學(xué)調(diào)查,但因其條件要求高,現(xiàn)場操作不便;PCR雖然可直接檢出病毒的基因,但所需的設(shè)備昂貴,在臨床檢測方面受到了很大的限制;膠體金方法目前國內(nèi)、外均有相關(guān)的產(chǎn)品問世,但其檢測靈敏度不高,只能定性,不能定量,該方法只能用于疫病診斷的輔助檢測。因此探索高效、特異、準(zhǔn)確的檢測手段對于禽流感的防控具有十分重要的意義�，F(xiàn)有的禽流感血清學(xué)檢測技術(shù)主要利用抗原抗體的反應(yīng),而目前國內(nèi)禽流感病毒抗體產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊,國外已有比較成熟的商品化抗體,抗體試劑主要依賴于進(jìn)口,但價(jià)格較昂貴。制備高效價(jià)、低成本、特異性強(qiáng)的單克隆抗體可為禽流感的防控提供必備的試劑原料。極大角度光纖光柵（exces... 

【文章來源】：重慶理工大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

AIV病毒結(jié)構(gòu)圖

圖 2.1 pET28a（+）/HA 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定M1-M2: DNA 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1-2: pET28a(+)/HA 雙酶切產(chǎn)物Fig.2.1 Double enzyme digestion of pET28a (+) /HA recombinant plasmiM1-M2: DNA marker; 1-2: pET28a (+)/HA double enzyme digestion produc質(zhì)粒的可溶性表達(dá)驗(yàn)證T28a(+)/HA 工程菌按照相關(guān)技術(shù)要求進(jìn)行試表達(dá)，采用文獻(xiàn)資進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)后，將菌體超聲波裂菌，離心取上清，將沉淀混PAGE 檢測。結(jié)果表明，發(fā)現(xiàn)在 70KD 處有明顯的蛋白條帶，帶，而且在 IPTG 為 0.5mmol/L 誘導(dǎo) 8h 時(shí)所試所有溫度下上，為可溶性表達(dá)，結(jié)果如圖 2.2 所示。

圖 2.2 HA 重組蛋白 SDS-PAGE 分析質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1: pET28a(+)空載體；2. 20℃上清；3. 20℃沉淀；4. 25℃上清沉淀；6. 30℃上清；7. 30℃沉淀；8. 37℃上清；9. 37℃沉淀；Fig.2.2 Analysis of recombinant HA protein by SDS-PAGE: Protein molecular marker; 1: pET28a(+) vector；2: Expresse supernatant 20 ℃; 3ecipitation 20 ℃; 4: Expresse supernatant 25 ℃; 5: Express precipitation 25 ℃; 6: upernatant 30 ℃; 7: Express precipitation 30 ℃; 8: Expresse supernatant 37 ℃; 9: precipitation 37℃;選重組菌株最佳誘導(dǎo)條件要影響蛋白表達(dá)三組因素，利用控制變量實(shí)驗(yàn)法對誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)誘導(dǎo)時(shí)間做逐次篩查，探索出 HA 重組蛋白的最佳誘導(dǎo)條件為 30mol/L，誘導(dǎo)時(shí)間 10h 。）加入適量的 1mmol/LIPTG，將 4 支試管分別放置于 20℃、25℃、

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]基于氧化石墨烯的光學(xué)生化傳感檢測研究[D]. 張倩.浙江大學(xué) 2017

碩士論文
[1]傾斜光纖光柵的譜特性與折射率傳感特性研究[D]. 高久鵬.南京郵電大學(xué) 2017
[2]基于81°傾斜光柵的光纖傳感器理論和實(shí)驗(yàn)的研究[D]. 舒慧.電子科技大學(xué) 2016
[3]常見流感病毒分型基因芯片檢測方法的建立和應(yīng)用[D]. 王斗.北京工業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：2965300