脂肪細(xì)胞的分化是極其復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程,在受到一系列轉(zhuǎn)錄因子級(jí)聯(lián)調(diào)控的同時(shí),各種細(xì)胞因子也能夠通過(guò)復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),參與啟動(dòng)和調(diào)控脂肪細(xì)胞的分化和維持細(xì)胞特性。作為機(jī)體重要的內(nèi)分泌器官之一,脂肪組織分泌的脂肪細(xì)胞因子對(duì)脂肪細(xì)胞的形成發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用。經(jīng)研究證實(shí),脂肪細(xì)胞因子的功能性紊亂會(huì)導(dǎo)致肥胖和胰島素抵抗（Insulin Resistance, IR）等相關(guān)代謝疾病。除此之外,脂肪細(xì)胞因子還能參與調(diào)節(jié)家畜體脂沉積和肌肉發(fā)育等肉質(zhì)性狀。因此,深入研究脂肪細(xì)胞因子作用的分子機(jī)理,已成為闡明脂肪組織形成的重要組成部分,并對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)的肉質(zhì)改良有著重要意義。RBP4屬于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族成員,是視黃醇（維生素A）的特定轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。RBP4將肝臟儲(chǔ)存的視黃醇轉(zhuǎn)運(yùn)到其他外周組織,并協(xié)助視黃醇發(fā)揮生理功能。研究發(fā)現(xiàn)RBP4作為脂肪細(xì)胞因子,能夠參與調(diào)控脂肪細(xì)胞的葡萄糖吸收,并在機(jī)體IR中發(fā)揮重要作用。RBP4的新功能推動(dòng)了病理與生理機(jī)制、脂肪細(xì)胞因子與炎癥反應(yīng)之間關(guān)系的探討,使其成為藥物開(kāi)發(fā)的新靶標(biāo)。但目前有關(guān)RBP4對(duì)脂肪細(xì)胞分化的機(jī)理研究相對(duì)較少。動(dòng)物脂肪沉積與肌肉發(fā)育實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),RBP4... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    前言
    第一章 脂肪細(xì)胞形成的調(diào)節(jié)因子
        1.1 轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子
            1.1.1 PPARγ
            1.1.2 C/EBPs
            1.1.3 其他轉(zhuǎn)錄因子
        1.2 脂肪細(xì)胞因子
            1.2.1 Adiponectin
            1.2.2 Leptin
            1.2.3 Resistin
            1.2.4 Interleukin-6
    第二章 RBP4的研究進(jìn)展
        2.1 RBP基因簡(jiǎn)介
            2.1.1 RBP的基因結(jié)構(gòu)
            2.1.2 RBP的作用機(jī)制
        2.2 RBP4的生物學(xué)功能
            2.2.1 RBP4簡(jiǎn)介及其新功能的發(fā)現(xiàn)
            2.2.2 RBP4與肥胖和胰島素抵抗的研究
            2.2.3 RBP4與代謝綜合癥的研究
            2.2.4 RBP4在人脂肪細(xì)胞中的研究
實(shí)驗(yàn)研究
    前言
    第三章 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 試劑配制
            3.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)用試劑
            3.1.2 生化實(shí)驗(yàn)用試劑
            3.1.3 蛋白檢測(cè)用試劑
        3.2 實(shí)驗(yàn)材料
            3.2.1 細(xì)胞來(lái)源
            3.2.2 載體
            3.2.3 抑制劑
        3.3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.3.1 BJ5183感受態(tài)細(xì)胞的制備
            3.3.2 pAd-RBP4超表達(dá)載體的構(gòu)建及病毒包裝
            3.3.3 pLentiH1-RBP4 shRNA干擾載體的構(gòu)建及病毒包裝
            3.3.4 病毒滴度測(cè)定
            3.3.5 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
            3.3.6 Real-time quantitative PCR
            3.3.7 Western blot
            3.3.8 免疫熒光
            3.3.9 BODIPY和油紅O染色
            3.3.10 免疫共沉淀
            3.3.11 冰凍切片的制備
            3.3.12 冰凍切片HE染色
            3.3.13 冰凍切片IF染色
            3.3.14 其他操作步驟
        3.4 數(shù)據(jù)分析
    第四章 RBP4在豬脂肪細(xì)胞中的表達(dá)模式分析
        4.1 材料與方法
        4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            4.2.1 RBP4隨豬前體脂肪細(xì)胞分化表達(dá)增加
            4.2.2 RBP4在豬成熟脂肪細(xì)胞中高表達(dá)
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
    第五章 超表達(dá)RBP4對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞分化的影響
        5.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            5.2.1 RBP4重組腺病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
            5.2.2 RBP4重組腺病毒的包裝、擴(kuò)繁及滴度測(cè)定
            5.2.3 Ad-RBP4感染豬前體體脂肪細(xì)胞的效果
            5.2.4 超表達(dá)RBP4抑制豬前體脂肪細(xì)胞體外分化
            5.2.5 超表達(dá)RBP4影響豬脂肪細(xì)胞脂解基因的表達(dá)
        5.3 討論
        5.4 小結(jié)
    第六章 干擾RBP4對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞分化的影響
        6.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        6.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            6.2.1 重組慢病毒干擾載體構(gòu)建及鑒定
            6.2.2 RBP4重組慢病毒的包裝、擴(kuò)繁及滴度測(cè)定
            6.2.3 pLentiH1-RBP4 shRNA感染豬前體脂肪細(xì)胞效果
            6.2.4 干擾RBP4促進(jìn)豬前體脂肪細(xì)胞分化
        6.3 討論
        6.4 小結(jié)
    第七章 RBP4調(diào)節(jié)insulin信號(hào)通路的作用機(jī)制
        7.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        7.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            7.2.1 RBP4對(duì)豬前體脂肪細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路因子的影響
            7.2.2 insulin誘導(dǎo)RBP4蛋白表達(dá)并激活insulin信號(hào)通路
            7.2.3 抑制劑LY294002處理濃度和時(shí)間的篩選
            7.2.4 干擾RBP4可以緩解LY294002的作用
            7.2.5 RBP4能夠與AKT形成復(fù)合物
        7.3 討論
        7.4 小結(jié)
    第八章 RBP4對(duì)小鼠腹部脂肪組織的影響
        8.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        8.2 技術(shù)路線
        8.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            8.3.1 Ad-RBP4可增加小鼠腹脂中RBP4的表達(dá)
            8.3.2 RBP4影響小鼠腹脂沉積速度
            8.3.3 RBP4影響小鼠腹脂細(xì)胞大小
            8.3.4 RBP4可引起小鼠腹脂的胰島素抵抗
        8.4 討論
        8.5 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
后續(xù)研究
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞表
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]RBP4作為核受體輔活化子新功能的研究[D]. 陳健.第三軍醫(yī)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：2964839