干擾素（Interferon，IFN）是由動物細(xì)胞產(chǎn)生的，具有抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等作用的一類細(xì)胞因子。IFN分為I型、II型和新發(fā)現(xiàn)的III型，III型干擾素又稱為IFN-λs，其氨基酸水平和蛋白質(zhì)功能與I型相近。由于IFN-λs受體組織分布特異性，IFN-λs主要在呼吸道、消化道和皮膚黏膜組織以及上皮細(xì)胞或某些腫瘤細(xì)胞發(fā)揮抗病毒作用，與IFN-α相比，能夠有效地降低毒副作用。在我國，奶牛病毒性傳染病如口蹄疫（FMD）、牛病毒性腹瀉�。˙VD）和牛傳染性鼻氣管炎（IBR）等可通過消化道、呼吸道傳播的疫病，至今危害仍比較嚴(yán)峻，因此牛IFN-λs成為繼IFN-α和IFN-β后，抗病毒制劑研發(fā)的一個方向。為深入研究牛IFN-λs的抗病毒活性及其機(jī)制，揭示其用于防治牛病毒病的可行性，本研究利用畢赤酵母分泌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了無冗余氨基酸的重組牛IFN-λ3，同時酵母分泌表達(dá)了重組牛IFN-α和IFN-β，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了重組牛IFN-β和IFN-γ，深入研究了各重組干擾素的抗病毒活性，比較了IFN-λ3與I型和II型干擾素單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用抗病毒活性的異同，主要研究內(nèi)容如下：1.首先在畢赤酵... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

干擾素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)JAK-STAT經(jīng)典途徑（摘自RaymondP.Donnelly，2010[25]

7圖 1-2 干擾素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑（摘自 Mingcai Li，2009[26]）Figure 1-2 Signaling pathways of IFNs, which activate STAT-dependent and -independentpathways

激活 RNase L 后，降解細(xì)胞和病毒 RNA，抑制病毒相關(guān)蛋白分子的合成，從而抑制病毒增殖[61]�；� 2”5’-OAS 主要在胞漿發(fā)揮作用的活性特點(diǎn)，其在抗腦心肌炎病毒（EMCV和艾滋病毒（HIV-l）等在胞漿中增殖復(fù)制的病毒感染中發(fā)揮重要作用，而對于在胞核復(fù)制的病毒，如水泡性口腔炎病毒（VSV）和單純疙疹病毒（HSV）等，可能沒有作用[62]。4）Mx1粘病毒抗性蛋白 1（myxovirus resistanceprotein 1，Mx1，也稱為 MxA 蛋白），Mx1 蛋白屬于動力超家族蛋白分子成員，其特征為具有內(nèi)在的三磷酸鳥苷類活性即 GTPase 活性和在細(xì)胞內(nèi)形成高分子量的低聚物，其 GTPase 區(qū)域位于 N-端，動力樣結(jié)構(gòu)、含有亮氨酸拉鏈基序的 GTP 活性結(jié)構(gòu)域（GED）位于 C-端。其主要作用為抗病毒活性，其他如細(xì)胞內(nèi)空泡轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞器動態(tài)平衡也與該蛋白有一定的關(guān)系。其對正黏病毒和副黏病毒等大多數(shù)病毒包括DNA 病毒（如麻疹病毒、流感病毒、水泡性口炎病毒、乙型肝炎病毒等）均較為敏感[63-65]。對病毒的增殖位點(diǎn)要求不嚴(yán)格，是 IFN 介導(dǎo)抗病毒作用的關(guān)鍵成份。到目前為止其抗病毒機(jī)制尚未完全了解也很難界定它主要抑制病毒復(fù)制的那個環(huán)節(jié)，推測的可能抗病毒機(jī)制是 Mx識別病毒核衣殼，通過形成 Mx1-核衣殼復(fù)合物使病毒成份運(yùn)送錯誤，進(jìn)而逐漸使病毒喪失感染力[47, 66]。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]信號肽與分泌通路在畢赤酵母表達(dá)異源蛋白中的作用機(jī)制[J]. 張勇,毛若雨,胡小媛,滕達(dá),王秀敏,王建華,王安如.  中國飼料. 2013(01)
[2]內(nèi)含肽和麥芽糖結(jié)合蛋白介導(dǎo)具有抗病毒活性牛α干擾素的表達(dá)[J]. 崔子寅,王藝萌,唐博,孫旭燕,高明春,王君偉.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2012(05)
[3]桿狀病毒介導(dǎo)外源基因在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)的研究進(jìn)展[J]. 田飛鵬,曹軼梅,盧曾軍,高云英,劉在新.  微生物學(xué)通報. 2009(12)
[4]牛β-干擾素在新城疫病毒La Sota疫苗株中的高效穩(wěn)定表達(dá)及抗病毒活性檢測[J]. 葛金英,解希帝,丁玉林,曹有才,毛偉,劉娣,步志高.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2009(19)
[5]牛IFN-α基因高效表達(dá)及純化的研究[J]. 孫仰峰,李文輝,李勐,高明春,王薇,魏雙施,王君偉.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2008(11)
[6]畢赤酵母N-糖基化改造的研究進(jìn)展[J]. 張倩,宋海峰.  中國新藥雜志. 2008(14)
[7]重組桿狀病毒表達(dá)牛β干擾素及其生物學(xué)活性研究[J]. 陳偉業(yè),肇慧君,王喜軍,黃克和,步志高,曹文雁,葛金英,溫志遠(yuǎn).  微生物學(xué)報. 2007(06)
[8]重組魯西黃牛α干擾素融合蛋白的表達(dá)及其抗病毒活性研究[J]. 張永紅,王長法,楊少華,高運(yùn)東,王洪梅,李景鵬,仲躋峰.  生物工程學(xué)報. 2007(04)
[9]牛IFN-γ原核表達(dá)、單克隆抗體制備及其ELISA檢測方法的建立[J]. 李川,譚亞娣,陳穎鈺,胡巧云,馬艷,張桂榮,欽博,晁彥杰,陳煥春,郭愛珍.  生物工程學(xué)報. 2007(01)
[10]牛γ-干擾素在牛結(jié)核檢測中的研究應(yīng)用[J]. 李彤,張以芳,羅佳琴.  中國畜牧獸醫(yī). 2006(11)



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