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河南地區(qū)豬細小病毒的分離鑒定及免疫原性研究

發(fā)布時間:2021-01-07 20:25
  豬細小病毒(Porcine parvovirus,PPV)屬細小病毒科、細小病毒屬。是引起母豬繁殖障礙的主要病原體之一。主要表現(xiàn)為初產(chǎn)母豬流產(chǎn),胎兒和胚胎的感染和死亡,產(chǎn)出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔豬等,而受感染母豬本身通常并不表現(xiàn)臨床癥狀。仔豬會出現(xiàn)生長受阻,偶有皮炎和腹瀉癥狀。感染公豬則表現(xiàn)為精液品質(zhì)下降。PPV又常同豬偽狂犬病病毒(PRV)、乙型腦炎病毒(JEV)、豬圓環(huán)病毒(PCV)、豬瘟(CSFV)、豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒(PRRSV)等混合感染而加重了其危害。PPV感染普遍存在于世界各地的豬群中,嚴重影響和制約著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。PPV自二十世紀六十年代被發(fā)現(xiàn)以來,許多國家先后分離到該病毒和檢測到其抗體,抗體檢出率為50%~80%,其中我國高達80%。近年來,PPV感染和造成的危害呈上升趨勢,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。本試驗從采集疑似感染PPV的病料中分離出了 4株P(guān)PV,進行了全基因組測序及相關(guān)生物學(xué)特性研究,并對PPV的滅活條件進行了探索,對河南地區(qū)分離株進行豚鼠免疫試驗,以期為臨床上該病的防治提供試驗依據(jù)。本實驗從流產(chǎn)死胎及木乃伊胎中分離出了 4株P(guān)PV病毒,... 

【文章來源】:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】:55 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

河南地區(qū)豬細小病毒的分離鑒定及免疫原性研究


圖1-丨組織病料中PPV的PCR擴增結(jié)果??Fi.?1-1?PCR?amlication?results?of?PPV?in?the?infected?orans??

序列,細胞,蝕斑,病料


_.x.tp?—??lCCbp?—??圖1-丨組織病料中PPV的PCR擴增結(jié)果??Fig.?1-1?PCR?amplication?results?of?PPV?in?the?infected?organs??M.?DNA?Marker?DL?2000:?1.?PPV檢測引物的PCR擴增產(chǎn)物;2.陰性對照??M.?DNA?Marker?DL2000;?1.?PCR?product?of?PPV:?2.?Negative?control??陽性克隆測序結(jié)果表明PCR擴增片段長度為195?bp,與預(yù)期結(jié)果相符合。將陽性片段序??列與GenBank中已發(fā)表的多株豬細小病毒序列進行核苷酸同源性比較后,發(fā)現(xiàn)同源性可達到??100%。測序結(jié)果如下:??CCAAAAATGCAAACCCCAATAAATACACCAACAGACTCTCAGATTTCCACATCAG??TGAAAACTTCGCCAGCGGACAACAACTACGCAGCAACTCCAATACAGGAGGACCTGG??ATTTAGCTTTAGCCTTGGAGCCGTGGAGCGAGCCAACAACACCAACTTTCACCAACCT??GCACTTAACTCCAACACCGCCAGAT??2.2?PPV分離株的分離培養(yǎng)與細胞病變觀察??將處理后的病料接種于ST細胞,盲傳至第5代細胞出現(xiàn)輕微的CPE,第10代時細胞??出現(xiàn)了較穩(wěn)定的CPE?正常的ST細胞緊密地貼壁生長,接毒第10代后細胞內(nèi)顆粒增多,??隨后出現(xiàn)病毒蝕斑,蝕斑周圍細胞圓縮,接著大片脫落,細胞拉網(wǎng),很多細胞發(fā)生裂解、破??碎

照片,間接免疫熒光,照片,熒光


2.6間接免疫焚光鑒定結(jié)果??將PPV分離株的細胞毒做適當(dāng)處理后,按照常規(guī)免疫熒光操作方法?稍诘怪脽晒怙@??微鏡下看到細胞核或胞漿內(nèi)呈閃亮蘋果綠色顆粒型熒光(圖14):??19??

【參考文獻】:
期刊論文
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博士論文
[1]豬細小病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和結(jié)構(gòu)蛋白VP2的研究[D]. 卿柳庭.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]豬細小病毒河南流行株的分離、鑒定及部分生物學(xué)特性研究[D]. 顧帥.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]豬偽狂犬病、細小病毒病和乙型腦炎三聯(lián)滅活疫苗的研制[D]. 何永龍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[3]河南株P(guān)PV的分離鑒定及VP2基因的克隆與序列分析[D]. 王宏魁.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[4]豬細小病毒分離株感染母豬及胎豬的體內(nèi)組織分布及病理變化[D]. 苗嵐飛.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[5]豬細小病毒NS1與VP2基因的研究[D]. 蘇曉健.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[6]豬細小病毒SR-1株全基因測序研究[D]. 張宇.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[7]豬細小病毒(PPV-SC1)的分離、鑒定及其非結(jié)構(gòu)蛋白NS1基因的克隆和序列分析[D]. 殷華平.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號:2963187

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