外膜蛋白F（OmpF）是大腸桿菌重要的外膜蛋白之一，孔徑為1nm，許多營養(yǎng)物質(zhì)和β-內(nèi)酰胺類抗生素大多經(jīng)過此通道擴散入菌體內(nèi)。β-內(nèi)酰胺類抗生素作用的靶分子是位于細菌細胞膜上的青霉素結(jié)合蛋白（PBPs），革蘭氏陰性菌對β-內(nèi)酰胺類耐藥性主要與β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生和外膜的存在有關(guān)。細菌膜孔蛋白表達量降低或者缺失將會造成細菌對β-內(nèi)酞胺類抗生素產(chǎn)生耐藥性，基因敲除技術(shù)是研究基因功能的重要手段。為研究OmpF基因在大腸桿菌對β-內(nèi)酰胺類耐藥中的作用，本試驗利用λ噬菌體RED重組系統(tǒng)對本實驗室保存的大腸桿菌菌株構(gòu)建OmpF基因缺失株，并通過PCR、聚丙烯酰胺凝膠電泳、測序等方法對缺失株進行鑒定，成功構(gòu)建了OmpF基因缺失株。運用藥敏實驗和MIC實驗檢測比較大腸桿菌親本株與基因OmpF缺失株對β-內(nèi)酰胺類中幾種抗生素的耐藥性，從而了解OmpF與β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥關(guān)系。結(jié)果顯示：在本實驗中成功構(gòu)建了OmpF基因缺失株，在對親本株與基因缺失株做耐藥性檢測發(fā)現(xiàn)，藥敏試驗中親本株對CZ，CFP，AMP，MPN，IPM，CRO，CAZ，VI都敏感；而缺失株對CZ，MPN，AMP，CAZ為中介，對CFP，... 

【文章來源】：云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

菌株F-M-2抑菌圈直徑菌株F-M-2抑菌圈直徑分別是：24mm（氯霉素），18mm（氨芐西林）

圖3-1 菌株 F-M-2抑菌圈直徑菌株 F-M-2抑菌圈直徑分別是：24mm（氯霉素），18mm（氨芐西林）Fig 3-1 The antibacterial circle diameter of strain F-M-2The antibacterial circle diameter of strain F-M-2 is respectively：24mm（Chloramphenicol），18mm（Ampicillin）3.2 陽性菌株 F-M-2/OmpF 基因的克隆測序結(jié)果陽性菌株 F-M-2/OmpF 基因的克隆測序結(jié)果見圖3-2：

注：右上角為 OmpF 同源性比較，左下角為 OmpF 差異性比較。圖 3-4 OmpF 基因同源性分析Fig 3-4 The homology analysis of OmpF genes顯示陽性菌株 F-M-2 與 GENBANK 中登錄號為 CP003301，U00096.3 等同源性近。3.4 OmpF 蛋白預(yù)測分析3.4.1 OmpF 蛋白質(zhì)疏水性分析登錄 http://web.expasy.org/protscale/，對 OmpF 蛋白質(zhì)疏水性分析。結(jié)果顯示總均疏水指數(shù)為-0.49，為親水性蛋白，見圖 3-5：


本文編號：2961759