產(chǎn)氣莢膜梭菌是重要的人畜共患病原菌,在獸醫(yī)臨床已嚴(yán)重影響到畜禽的健康養(yǎng)殖。但國內(nèi)有關(guān)該菌在肉羊與水禽的流行病學(xué)和毒力特性方面缺乏系統(tǒng)研究,一定程度制約了其臨床防控。本研究采集了華東部分地區(qū)肉羊、水禽的樣品,在對產(chǎn)氣莢膜梭菌分子流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上,鑒定了臨床分離菌株的毒素基因型和藥物敏感性。最后,運(yùn)用實(shí)驗(yàn)小鼠對不同來源、毒素型產(chǎn)氣莢膜梭菌的毒力進(jìn)行測定,為該病的精準(zhǔn)防控提供依據(jù)。1.華東部分地區(qū)肉羊源、水禽源產(chǎn)氣莢膜梭菌的分子流行病學(xué)分析本實(shí)驗(yàn)對取自蘇北地區(qū)的肉羊樣品和華東部分地區(qū)的水禽樣品進(jìn)行快速增菌后,粗提DNA,以PCR法檢測動(dòng)物感染產(chǎn)氣莢膜梭菌情況。結(jié)果顯示,在肉羊臨床934份糞樣和20份組織樣中,175份（18.74%）糞樣和4份（20%）組織樣檢測出產(chǎn)氣莢膜梭菌陽性。其中,健康糞樣的陽性檢出率為19.51%,發(fā)病糞樣的陽性檢出率為2.38%,檢測出陽性組織樣均為病死樣;在水禽臨床462份糞樣和87份組織樣中,202份（43.72%）糞樣和3份（3.45%）組織樣檢測出產(chǎn)氣莢膜梭菌陽性。其中,健康糞樣的陽性檢出率為45.79%,發(fā)病糞樣的陽性檢出率為4.35%;檢測出陽性組織... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＰＣＲ檢測產(chǎn)氣莢膜梭菌的特異性圖??Ｆｉｇ．?ｌ－ｌ?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?Ｍａｐ?ｆｏｒ?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ?ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??３：；４：；??

２．２?ＰＣＲ鑒定??挑取平板上符合生長特征的菌落，經(jīng)増菌、提ＤＮＡ模板、ＰＣＲ后，１％瓊脂糖凝膠電??泳進(jìn)行驗(yàn)證，部分結(jié)果如圖２－２所示�？梢姺仙L特征的菌落ＰＣＲ驗(yàn)證均為陽性。??ｂｐ?Ｍｌ?２３４５６７８９?１０??５Ｍ世：??圖２－２分離菌ＰＣＲ擴(kuò)增電泳圖??Ｆｉｇ．?２－２?Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｍａｐ?ｏｆ?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?Ｂａｃｔｅｒｉａ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ２０００分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；１￣１０：分離菌。??２．３革蘭染色鏡檢??細(xì)菌純化后經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，可見兩端鈍圓的革蘭陽性直桿狀菌，多為單個(gè)散在或??成對排列，無鞭毛，如圖２－３所示。??２．４亞甲基藍(lán)染色鏡檢??細(xì)菌經(jīng)亞甲基藍(lán)染色后能看到莢膜，如圖２－４所示。??Ｖ?氣?＾：‘，？：：一??、＇?＜??Ｉ?＇。：??圖２－３細(xì)菌革蘭氏染色結(jié)果（ｘｌＯＯＯ）?圖２－４細(xì)菌亞甲基藍(lán)染色結(jié)果（ｘｌ〇〇〇）??Ｆｉｇ．?２－３?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉａ?Ｆｉｇ．?２－４?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ?ｂｌｕｅ??２．５?生化試驗(yàn)（Ｘ＿?ＳｔａｂｉｎｇｒｅＳＵ＇ｔＳ（Ｘｌ〇〇〇）??對分離純化后的肉羊源和水禽源細(xì)菌進(jìn)行生化試驗(yàn)的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)株相同，如表２－２。??

２．２?ＰＣＲ鑒定??挑取平板上符合生長特征的菌落，經(jīng)増菌、提ＤＮＡ模板、ＰＣＲ后，１％瓊脂糖凝膠電??泳進(jìn)行驗(yàn)證，部分結(jié)果如圖２－２所示�？梢姺仙L特征的菌落ＰＣＲ驗(yàn)證均為陽性。??ｂｐ?Ｍｌ?２３４５６７８９?１０??５Ｍ世：??圖２－２分離菌ＰＣＲ擴(kuò)增電泳圖??Ｆｉｇ．?２－２?Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｍａｐ?ｏｆ?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?Ｂａｃｔｅｒｉａ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ２０００分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；１￣１０：分離菌。??２．３革蘭染色鏡檢??細(xì)菌純化后經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，可見兩端鈍圓的革蘭陽性直桿狀菌，多為單個(gè)散在或??成對排列，無鞭毛，如圖２－３所示。??２．４亞甲基藍(lán)染色鏡檢??細(xì)菌經(jīng)亞甲基藍(lán)染色后能看到莢膜，如圖２－４所示。??Ｖ?氣?＾：‘，？：：一??、＇?＜??Ｉ?＇。：??圖２－３細(xì)菌革蘭氏染色結(jié)果（ｘｌＯＯＯ）?圖２－４細(xì)菌亞甲基藍(lán)染色結(jié)果（ｘｌ〇〇〇）??Ｆｉｇ．?２－３?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉａ?Ｆｉｇ．?２－４?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ?ｂｌｕｅ??２．５?生化試驗(yàn)（Ｘ＿?ＳｔａｂｉｎｇｒｅＳＵ＇ｔＳ（Ｘｌ〇〇〇）??對分離純化后的肉羊源和水禽源細(xì)菌進(jìn)行生化試驗(yàn)的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)株相同，如表２－２。??


本文編號：2959093