產氣莢膜梭菌是重要的人畜共患病原菌,在獸醫(yī)臨床已嚴重影響到畜禽的健康養(yǎng)殖。但國內有關該菌在肉羊與水禽的流行病學和毒力特性方面缺乏系統(tǒng)研究,一定程度制約了其臨床防控。本研究采集了華東部分地區(qū)肉羊、水禽的樣品,在對產氣莢膜梭菌分子流行病學調查的基礎上,鑒定了臨床分離菌株的毒素基因型和藥物敏感性。最后,運用實驗小鼠對不同來源、毒素型產氣莢膜梭菌的毒力進行測定,為該病的精準防控提供依據。1.華東部分地區(qū)肉羊源、水禽源產氣莢膜梭菌的分子流行病學分析本實驗對取自蘇北地區(qū)的肉羊樣品和華東部分地區(qū)的水禽樣品進行快速增菌后,粗提DNA,以PCR法檢測動物感染產氣莢膜梭菌情況。結果顯示,在肉羊臨床934份糞樣和20份組織樣中,175份（18.74%）糞樣和4份（20%）組織樣檢測出產氣莢膜梭菌陽性。其中,健康糞樣的陽性檢出率為19.51%,發(fā)病糞樣的陽性檢出率為2.38%,檢測出陽性組織樣均為病死樣;在水禽臨床462份糞樣和87份組織樣中,202份（43.72%）糞樣和3份（3.45%）組織樣檢測出產氣莢膜梭菌陽性。其中,健康糞樣的陽性檢出率為45.79%,發(fā)病糞樣的陽性檢出率為4.35%;檢測出陽性組織... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＰＣＲ檢測產氣莢膜梭菌的特異性圖??Ｆｉｇ．?ｌ－ｌ?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?Ｍａｐ?ｆｏｒ?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ?ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??３：；４：；??

２．２?ＰＣＲ鑒定??挑取平板上符合生長特征的菌落，經増菌、提ＤＮＡ模板、ＰＣＲ后，１％瓊脂糖凝膠電??泳進行驗證，部分結果如圖２－２所示�？梢姺仙L特征的菌落ＰＣＲ驗證均為陽性。??ｂｐ?Ｍｌ?２３４５６７８９?１０??５Ｍ世：??圖２－２分離菌ＰＣＲ擴增電泳圖??Ｆｉｇ．?２－２?Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｍａｐ?ｏｆ?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?Ｂａｃｔｅｒｉａ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ２０００分子質量標準；１￣１０：分離菌。??２．３革蘭染色鏡檢??細菌純化后經革蘭氏染色鏡檢，可見兩端鈍圓的革蘭陽性直桿狀菌，多為單個散在或??成對排列，無鞭毛，如圖２－３所示。??２．４亞甲基藍染色鏡檢??細菌經亞甲基藍染色后能看到莢膜，如圖２－４所示。??Ｖ?氣?＾：‘，？：：一??、＇?＜??Ｉ?＇。：??圖２－３細菌革蘭氏染色結果（ｘｌＯＯＯ）?圖２－４細菌亞甲基藍染色結果（ｘｌ〇〇〇）??Ｆｉｇ．?２－３?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉａ?Ｆｉｇ．?２－４?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ?ｂｌｕｅ??２．５?生化試驗（Ｘ＿?ＳｔａｂｉｎｇｒｅＳＵ＇ｔＳ（Ｘｌ〇〇〇）??對分離純化后的肉羊源和水禽源細菌進行生化試驗的結果與標準株相同，如表２－２。??

２．２?ＰＣＲ鑒定??挑取平板上符合生長特征的菌落，經増菌、提ＤＮＡ模板、ＰＣＲ后，１％瓊脂糖凝膠電??泳進行驗證，部分結果如圖２－２所示。可見符合生長特征的菌落ＰＣＲ驗證均為陽性。??ｂｐ?Ｍｌ?２３４５６７８９?１０??５Ｍ世：??圖２－２分離菌ＰＣＲ擴增電泳圖??Ｆｉｇ．?２－２?Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?Ｍａｐ?ｏｆ?Ｉｓｏｌａｔｅｄ?Ｂａｃｔｅｒｉａ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ２０００分子質量標準；１￣１０：分離菌。??２．３革蘭染色鏡檢??細菌純化后經革蘭氏染色鏡檢，可見兩端鈍圓的革蘭陽性直桿狀菌，多為單個散在或??成對排列，無鞭毛，如圖２－３所示。??２．４亞甲基藍染色鏡檢??細菌經亞甲基藍染色后能看到莢膜，如圖２－４所示。??Ｖ?氣?＾：‘，？：：一??、＇?＜??Ｉ?＇。：??圖２－３細菌革蘭氏染色結果（ｘｌＯＯＯ）?圖２－４細菌亞甲基藍染色結果（ｘｌ〇〇〇）??Ｆｉｇ．?２－３?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｂａｃｔｅｒｉａ?Ｆｉｇ．?２－４?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ?ｂｌｕｅ??２．５?生化試驗（Ｘ＿?ＳｔａｂｉｎｇｒｅＳＵ＇ｔＳ（Ｘｌ〇〇〇）??對分離純化后的肉羊源和水禽源細菌進行生化試驗的結果與標準株相同，如表２－２。??


本文編號：2959093