豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）俗稱“豬藍(lán)耳病”，是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus，PRRSV）引起的一種具有高發(fā)病率和死亡率的接觸性傳染病。PRRSV共有兩種基因型：歐洲型（Ⅰ型，LV株）和美洲型（Ⅱ型，VR2332株）；而我國(guó)流行的PRRSV以美洲型為主。研究證明，PRRSV GP5蛋白是由ORF5基因編碼的病毒的高度糖基化的囊膜蛋白，全長(zhǎng)200個(gè)氨基酸，含有多個(gè)中和性抗原表位，具有誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和性抗體的能力，被認(rèn)為是研制基因工程疫苗和亞單位疫苗的良好靶蛋白，成為PRRSV的研究熱點(diǎn)。但目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)針對(duì)GP5蛋白抗體檢測(cè)的商品化ELISA試劑盒，無(wú)法檢測(cè)免疫機(jī)體內(nèi)GP5蛋白的抗體水平，不能對(duì)免疫后中和性抗體的水平進(jìn)行有效評(píng)價(jià)。為解決這一難題，開(kāi)展了本項(xiàng)研究。為獲得重組GP5蛋白的高效表達(dá)，本研究利用RT-PCR技術(shù)從PRRSV SD-JN株（美洲型）的病毒基因組RNA中擴(kuò)增編碼GP5蛋白的... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PRRSV膜蛋白的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)圖

法RRSV 毒株5 細(xì)胞和高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（HP-PRRSV）SD學(xué)院動(dòng)物疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存。體桿菌 DH5α 為山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 BL21(DE3) pLysS 購(gòu)自 TransGen 公司pMD19-T Vector 購(gòu)自 TaKaRa 公司；載體的物理圖譜如圖 2 所示：

圖 3 pET-32a(+)原核表達(dá)載體物理圖譜e physical map of pET-32a (+) prokaryotic expression隆腹水抗體為中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所童鼠 IgG（H+L）抗體和 HRP 標(biāo)記的山羊抗豬 I性血清采自健康豬， 經(jīng) IDEXX 公司抗體檢測(cè)環(huán)病毒（PCV2）、豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂血清由本實(shí)驗(yàn)室制備并保存。轉(zhuǎn)錄酶 Prime ScriptTMOne Step RT-PCR Kit，DL限公司。DNATaq 聚合酶、T4 DNA 連接酶、

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鑒別歐洲型和美洲型PRRSV熒光定量RT-PCR方法的建立[J]. 溫青娜,周其偉,周玲玲.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2013(03)
[2]豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5和M基因重組腺病毒的構(gòu)建及表達(dá)[J]. 高博,馬玲,張念,毛燕,陳鳳蓮,張守峰,劉燁,張菲,扈榮良,吳健敏.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2012(01)
[3]我國(guó)高致病性豬藍(lán)耳病病毒的演化分析[J]. 安同慶,田志軍,李冉,彭金美,周艷君,華育平,劉娣,童光志.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2011(04)
[4]高致病性豬藍(lán)耳病病毒GS/LZh/07株的分離、鑒定及其非結(jié)構(gòu)蛋白Nsp2基因特性分析[J]. 吳錦艷,田宏,尚佑軍,劉湘濤,鄭海學(xué),靳野,尹雙輝,滿自萍,趙娜,蔡承茹,藺芳,謝慶閣.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(03)
[5]高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株主要囊膜糖蛋白GP5的遺傳變異分析[J]. 安同慶,田志軍,肖燕,姜一峰,韋天超,彭金美,周艷君,仇華吉,童光志.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2008(11)
[6]豬繁殖與呼吸綜合征病毒S-1株ORF5和ORF7基因的克隆及變異分析[J]. 張春玲,張婉華,臧克偉,王英,蔣鳳英,鄒勇,李春華,何錫忠.  上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2008(02)
[7]高致病性豬藍(lán)耳病的綜合防治[J]. 劉國(guó)信.  北京農(nóng)業(yè). 2007(22)
[8]高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定及其分子流行病學(xué)分析[J]. 童光志,周艷君,郝曉芳,田志軍,仇華吉,彭金美,安同慶.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(05)
[9]當(dāng)前國(guó)內(nèi)外豬的重要疾病與控制[J]. 姚龍濤.  養(yǎng)豬. 2004(04)
[10]豬免疫抑制性疾病的流行特點(diǎn)與控制對(duì)策[J]. 楊漢春.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2004(05)

博士論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征病毒全基因組分子遺傳特征分析[D]. 高志強(qiáng).中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003



本文編號(hào)：2958406