發(fā)布時(shí)間：2020-12-30 14:20

　　豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一種高度接觸性傳染病,是危害養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一。自發(fā)現(xiàn)以來已流行于世界上多個(gè)國家,我國更是深受CSFV侵害的國家之一。目前在中國流行的CSFV毒株與之前的流行株相比,在遺傳變異、毒力和致病性等方面都已發(fā)生了較大改變,這也使得我國對(duì)CSFV的防治面臨更嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。為了更好的預(yù)防與控制CSF,針對(duì)CSFV的致病機(jī)制,毒力的決定因素等問題仍需進(jìn)行更深入的探究。隨著實(shí)驗(yàn)研究的深入和相關(guān)學(xué)科的發(fā)展,反向遺傳學(xué)技術(shù)已經(jīng)成為研究RNA病毒的重要手段,在CSFV的研究中也發(fā)揮著越來越重要的作用。通過構(gòu)建高效經(jīng)濟(jì)的CSFV反向遺傳操作系統(tǒng)可以從基因水平上對(duì)CSFV有更深入的研究,也可以為CSFV的傳統(tǒng)研究提供更多的思路。本研究基于DNA-Launched反向遺傳技術(shù),采用RNA聚合酶Ⅱ系統(tǒng),分別構(gòu)建了含有CSFV兔化弱毒疫苗株及強(qiáng)毒石門株全長基因組序列的感染性克隆。通過在CSFV基因組的5’端引入巨細(xì)胞病毒（CMV）啟動(dòng)子,3’端引入丁型肝炎病毒（HDV）核... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬瘟病毒及其反向遺傳系統(tǒng)的研究進(jìn)展
        1.1 豬瘟病毒概述
            1.1.1 豬瘟病毒的分類學(xué)與形態(tài)學(xué)
            1.1.2 豬瘟的流行與分布
            1.1.3 豬瘟的臨床癥狀和病理變化
            1.1.4 豬瘟的診斷方法
            1.1.5 豬瘟的防控措施及展望
        1.2 反向遺傳系統(tǒng)在豬瘟病毒研究中的應(yīng)用
            1.2.1 RNA病毒反向遺傳學(xué)概述
            1.2.2 豬瘟病毒反向遺傳系統(tǒng)的背景與操作
            1.2.3 豬瘟病毒反向遺傳系統(tǒng)的應(yīng)用及展望
試驗(yàn)研究
    第二章 豬瘟病毒兔化弱毒疫苗株反向遺傳操作系統(tǒng)的建立及其初步應(yīng)用
        2.1 材料和方法
            2.1.1 細(xì)胞、病毒與質(zhì)粒
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.4 構(gòu)建CSFV C株感染性克隆的主要引物
            2.1.5 CSFV C株感染性克隆的構(gòu)建策略
            2.1.6 感染性克隆的轉(zhuǎn)染及病毒拯救
            2.1.7 拯救病毒的初步RT-PCR鑒定
            2.1.8 拯救病毒分子標(biāo)簽的鑒定
            2.1.9 拯救病毒的序列分析
            2.1.10 間接免疫熒光（IFA）鑒定
            2.1.11 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測
            2.1.12 Western blot鑒定
            2.1.13 病毒生長曲線的建立
            2.1.14 表達(dá)EGFP的重組豬瘟兔化弱毒疫苗株的構(gòu)建
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 CSFV C株感染性克隆的構(gòu)建
            2.2.2 CSFV C株拯救病毒的初步鑒定
            2.2.3 CSFV C株拯救病毒的序列分析
            2.2.4 CSFV C株拯救病毒生物學(xué)特性的驗(yàn)證
            2.2.5 CSFV C株拯救病毒一步生長曲線的建立
            2.2.6 含有EGFP基因的CSFV C株感染性克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
    第三章 豬瘟病毒石門株反向遺傳操作系統(tǒng)的建立
        3.1 材料和方法
            3.1.1 細(xì)胞、病毒與質(zhì)粒
            3.1.2 主要試劑與儀器設(shè)備
            3.1.3 構(gòu)建CSFV石門株感染性克隆的主要引物
            3.1.4 CSFV石門株感染性克隆的構(gòu)建策略
            3.1.5 感染性克隆的轉(zhuǎn)染及病毒拯救
            3.1.6 拯救病毒的初步RT-PCR鑒定與分子標(biāo)簽的鑒定
            3.1.7 拯救病毒的序列分析
            3.1.8 拯救病毒的生物學(xué)特性分析
            3.1.9 病毒生長曲線的建立
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 CSFV石門株感染性克隆的構(gòu)建
            3.2.2 CSFV石門株拯救病毒的初步鑒定
            3.2.3 CSFV石門株拯救病毒的序列分析
            3.2.4 CSFV石門株拯救病毒生物學(xué)特性的驗(yàn)證
            3.2.5 CSFV石門株拯救病毒一步生長曲線的建立
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]Rab1A和Rab5對(duì)豬瘟病毒增殖的影響及機(jī)制[D]. 林吉輝.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017



本文編號(hào)：2947790