發(fā)布時間：2020-12-29 13:49

　　腐敗梭菌（Clostridium septicum）是人氣性壞疽和動物惡性水腫的主要病原,也是羊快疫的病原,其產(chǎn)生的α毒素（Clostridium septicum alpha toxin,CSA）是其主要的致病因子和免疫原。由該菌引起的羊快疫發(fā)病急,往往來不及治療發(fā)病動物即行死亡,因此疫苗免疫是預(yù)防該病的唯一有效措施。預(yù)防該病的疫苗均由腐敗梭菌強(qiáng)毒培養(yǎng)物經(jīng)甲醛滅活脫毒制成菌體-類毒素疫苗,由于生產(chǎn)過程中需要培養(yǎng)大量的強(qiáng)毒菌液,存在著一定生物安全隱患。因而,無毒重組腐敗梭菌α毒素疫苗已成為新型疫苗的研制熱點(diǎn)。本研究依據(jù)大腸桿菌偏愛的密碼子,優(yōu)化合成包含信號肽的腐敗梭菌α毒素全基因并連接至pEZ-clone質(zhì)粒,以該質(zhì)粒為模板采用OEPR（Overlap Extension PCR and Recombination）法構(gòu)建了表達(dá)CSA的重組質(zhì)粒pET28a-csa,以pET28a-csa為模板,利用點(diǎn)突變技術(shù),成功構(gòu)建7個不同腐敗梭菌α毒素突變體的表達(dá)載體(pET28a-csa_C86L、pET28a-csa_Y118T、pET28a-csa

【文章來源】：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所北京市

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

本研究擬構(gòu)建的重組腐敗梭菌α毒素突變表達(dá)載體的基因示意圖

腐敗梭菌α毒素基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物M：DL2000Marker，1：毒素PCR產(chǎn)物

達(dá)載體 pET 28a-csa 的構(gòu)建法以pET-28a空質(zhì)粒為模板，以含有載體同源臂的csa片段為csa基因片段構(gòu)建至pET-28a載體上，pET28a-csa質(zhì)粒大小，與預(yù)期大小相符。圖 2.3 腐敗梭菌 α 毒素基因的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物M：DL2000 Marker，1： 毒素 PCR 產(chǎn)物

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]重組腐敗梭菌α毒素的免疫原性研究[D]. 彭國瑞.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 2014
[3]鹿巴氏桿菌與腐敗梭菌混合感染的診斷與治療[D]. 譚仕旦.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[4]腐敗梭菌α毒素基因克隆和表達(dá)的研究[D]. 張燕.河北師范大學(xué) 2006



本文編號：2945747