豬流行性腹瀉�。≒ED）是由病原體豬流行性腹瀉病毒（PEDV）感染引起的嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的腸道疾病,導(dǎo)致感染豬脫水、腹瀉和嘔吐,尤其對(duì)哺乳期的仔豬危害最大,發(fā)病率和死亡率極高,嚴(yán)重制約全球養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。但到目前為止,針對(duì)PEDV全球性暴發(fā)尚無有效的應(yīng)對(duì)措施,僅僅依靠緩解癥狀的藥物和疫苗來預(yù)防和控制,效果并不理想。因此,尋找出有效的抗PEDV藥物成了預(yù)防和控制PEDV的關(guān)鍵步驟。以往研究表明,PEDV既可以在加有胰酶的猴腎細(xì)胞（Vero）系中高效繁殖,也可以在宿主靶細(xì)胞豬小腸上皮細(xì)胞（IEC）中繁殖,且均能產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變（CytopathicEffect,CPE）,因此,Vero細(xì)胞與IEC細(xì)胞可作為篩選具有抗PEDV的目的基因的理想細(xì)胞系。本研究旨在利用慢病毒等相關(guān)技術(shù)構(gòu)建外周血單核細(xì)胞（PBMC）的免疫納米抗體庫,來尋找具有抗PEDV作用的基因。通過SMART技術(shù)獲得的VHHs文庫連接到慢病毒表達(dá)載體上,將包裝質(zhì)粒與慢病毒其他三個(gè)輔助質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,從而獲得具有感染性的慢病毒文庫,通過此文庫感染Vero細(xì)胞與IEC細(xì)胞,構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,并用PEDV病毒對(duì)此細(xì)胞系進(jìn)行篩... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CcdB-Cm基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

各有一條清晰條帶，與目的條帶的大小相符，由此可知，重組質(zhì)粒 pCD513B-1-Ccdb-Cm構(gòu)建成功。圖1-2. 質(zhì)粒pCD513B-1經(jīng)限制性內(nèi)切酶Xba I和BamH I酶切線性化的結(jié)果1：M. DL 15k DNA Marker；2：pCD513B-1原質(zhì)粒；3：pCD513B-1雙酶切；Fig.1-2 pCD513B-1 analyzed by restriction endonucleases Xba I and Bam H I digestion1：M. DL 15k DNA Marker；2：pCD513B-1plasmid; 3：Xba I/BamH I digestion of pCD513B-1圖 1-3 致死基因Ccdb-Cm經(jīng)限制性內(nèi)切酶Xba I和Bgl II酶切的結(jié)果1-2：Ccdb-Cm雙酶切結(jié)果；3：M. 2Kb plus DNA Marker；Fig.1-3 Ccdb-Cm analyzed by restriction endonucleases Xba I and Bgl II digestion1-2：Xba I/Bam H I digestion of Ccdb-Cm；3：M. 2Kb plus DNA Marker12

期吻合（圖 1-4）；將得到的重組質(zhì)凝膠電泳檢測分析，如圖 1-5 所示的條帶的大小相符，由此可知，重組513B-1經(jīng)限制性內(nèi)切酶Xba I和BamH I酶A Marker；2：pCD513B-1原質(zhì)粒；3：pnalyzed by restriction endonucleases Xba er；2：pCD513B-1plasmid; 3：Xba I/Bam

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬流行性腹瀉病毒與宿主抗病毒天然免疫抑制[J]. 郭存財(cái),劉炎,黃耀偉.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2016(09)

博士論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征病毒Nsp9蛋白納米抗體的篩選及其抗病毒功能研究[D]. 劉紅亮.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）Cap相互作用蛋白及其納米抗體的篩選與功能研究[D]. 付向晶.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014

碩士論文
[1]新城疫病毒融合蛋白納米抗體的篩選與鑒定[D]. 胡湘云.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[2]豬IEC酵母cDNA文庫的構(gòu)建及與PEDV結(jié)構(gòu)蛋白互作蛋白的篩選[D]. 徐天.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015



本文編號(hào)：2944217