分離和鑒定新疆地區(qū)BVDV流行毒株,掌握該毒株的生物學(xué)特性。在新疆北疆部分地區(qū)采集牛病毒性腹瀉（BVD）疑似病例的糞便,通過RT-PCR檢測(cè)、細(xì)胞分離培養(yǎng)、間接免疫熒光抗體檢測(cè)、免疫電鏡觀察及血清中和試驗(yàn)五種方法對(duì)BVDV進(jìn)行分離和鑒定。對(duì)毒株的TCID50測(cè)定,對(duì)毒株分別進(jìn)行抗乙醚、氯仿試驗(yàn)、抗胰蛋白酶試驗(yàn)、耐酸堿性試驗(yàn)、溫度敏感性試驗(yàn)及核酸分型試驗(yàn)等理化特性檢測(cè)。經(jīng)RT-PCR診斷,病料在預(yù)期擴(kuò)增286 bp處出現(xiàn)了目的片段。將RT-PCR診斷后為陽性的糞便,接種于密度約為80%單層MDBK細(xì)胞出現(xiàn)了細(xì)胞病變,盲傳5代至出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變。將F5代細(xì)胞培養(yǎng)物采用間接免疫熒光抗體檢測(cè),結(jié)果產(chǎn)生了與C24V標(biāo)準(zhǔn)毒株相同的特異性黃綠色熒光。免疫電鏡觀察到了大量BVDV粒子,形狀呈球形,大小約20-40 nm。血清中和試驗(yàn)中抗體陽性血清處理組細(xì)胞均未出現(xiàn)細(xì)胞病變,病毒完全被抗體陽性血清中和。根據(jù)以上結(jié)果確定為BVDV毒株。對(duì)BVDV分離株進(jìn)行毒價(jià)和理化特性測(cè)定,結(jié)果表明該毒株TCID50為10-4.5/0.1 mL,對(duì)乙醚和氯仿敏感,對(duì)胰蛋白酶敏感,耐堿不耐酸,對(duì)溫度敏感,經(jīng)54℃60 m... 

【文章來源】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

病毒分離結(jié)果(100×)

間接免疫熒光抗體檢測(cè)圖 2-3 所示，在激光共聚焦顯微鏡下，陰性對(duì)照沒有出現(xiàn)黃綠色熒光，V 標(biāo)準(zhǔn)毒株出現(xiàn)了特異性黃綠色熒光，試驗(yàn)結(jié)果成立，待檢樣出現(xiàn)了和標(biāo)的特異性黃綠色熒光，說明該樣品中存在 BVDV。正常細(xì)胞對(duì)照 Normal cell controlC24V 陽性對(duì)照 C24V positive control

BVDV 形態(tài)學(xué)鑒定.1 負(fù)染電鏡觀察如圖 2-4 所示，經(jīng)過負(fù)染法在電鏡下可以看到待測(cè)樣品中有大小約 40 nm 左，形狀為球形，在 C24V 標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)照組中看到了幾個(gè)大小約為 70 nm 左右的

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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