分離和鑒定新疆地區(qū)BVDV流行毒株,掌握該毒株的生物學特性。在新疆北疆部分地區(qū)采集牛病毒性腹瀉（BVD）疑似病例的糞便,通過RT-PCR檢測、細胞分離培養(yǎng)、間接免疫熒光抗體檢測、免疫電鏡觀察及血清中和試驗五種方法對BVDV進行分離和鑒定。對毒株的TCID50測定,對毒株分別進行抗乙醚、氯仿試驗、抗胰蛋白酶試驗、耐酸堿性試驗、溫度敏感性試驗及核酸分型試驗等理化特性檢測。經RT-PCR診斷,病料在預期擴增286 bp處出現了目的片段。將RT-PCR診斷后為陽性的糞便,接種于密度約為80%單層MDBK細胞出現了細胞病變,盲傳5代至出現典型的細胞病變。將F5代細胞培養(yǎng)物采用間接免疫熒光抗體檢測,結果產生了與C24V標準毒株相同的特異性黃綠色熒光。免疫電鏡觀察到了大量BVDV粒子,形狀呈球形,大小約20-40 nm。血清中和試驗中抗體陽性血清處理組細胞均未出現細胞病變,病毒完全被抗體陽性血清中和。根據以上結果確定為BVDV毒株。對BVDV分離株進行毒價和理化特性測定,結果表明該毒株TCID50為10-4.5/0.1 mL,對乙醚和氯仿敏感,對胰蛋白酶敏感,耐堿不耐酸,對溫度敏感,經54℃60 m... 

【文章來源】：新疆農業(yè)大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

病毒分離結果(100×)

間接免疫熒光抗體檢測圖 2-3 所示，在激光共聚焦顯微鏡下，陰性對照沒有出現黃綠色熒光，V 標準毒株出現了特異性黃綠色熒光，試驗結果成立，待檢樣出現了和標的特異性黃綠色熒光，說明該樣品中存在 BVDV。正常細胞對照 Normal cell controlC24V 陽性對照 C24V positive control

BVDV 形態(tài)學鑒定.1 負染電鏡觀察如圖 2-4 所示，經過負染法在電鏡下可以看到待測樣品中有大小約 40 nm 左，形狀為球形，在 C24V 標準株對照組中看到了幾個大小約為 70 nm 左右的

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2936848