產仔數(shù)是衡量母豬繁殖力的重要指標,中國高產豬種比外來豬種平均每頭的產仔數(shù)要高3-5頭,早期附植階段的胚胎丟失是影響產仔數(shù)的關鍵因素,因此明確早期胚胎附植的機理、篩選影響胚胎附植的關鍵基因對提高產仔數(shù)有重要的作用。本研究以高繁殖力純種梅山豬和大白豬的初產母豬為研究對象,選取妊娠9天、12天、15天和空懷12天外周血液和子宮組織為實驗材料,通過生理生化指標、組織形態(tài)學觀察和組學測序方法,分析早期胚胎附植階段的組織形態(tài)和分子水平的變化,篩選可能影響胚胎附植的關鍵信號通路和調控基因,并進行基因的功能驗證。主要實驗結果如下:1)我們用電化學發(fā)光法檢測了附植早期外周血液中雌激素和孕激素的變化情況,發(fā)現(xiàn)雌激素在妊娠12天水平最高,之后呈降低趨勢。另外,HE染色法觀察了豬早期附植階段的子宮組織的形態(tài)學變化,發(fā)現(xiàn)隨著妊娠時間的延長,子宮內膜褶皺變少,內膜壁變平滑。2)轉錄組測序的方法獲得了大白豬子宮內膜編碼和非編碼基因的表達譜,得到了2805個lncRNA和28055個circRNA,進行了lncRNA和mRNA的結構和表達量的對比分析,發(fā)現(xiàn)lncRNA要比mRNA短,外顯子數(shù)目少,序列保守性和表達量也... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

胚胎附植過程的信號通路(Wang&Dey2006)

豬早期胚胎附植階段子宮內膜轉錄組測序分析及關鍵基因作用研究深度測序分析揭示了豬懷孕和發(fā)情周期過程中子宮內膜的 miRNA 和序列somiRs）的所有組成成分。差異表達的 miRNA 可以聚類到以下功能和途徑發(fā)育、細胞周期、炎癥反應和細胞形態(tài)、胚胎發(fā)育等，表明它們參與組織宮的植入和胎盤準備等生物學過程。體外實驗表明，isomiRs（即 miR-14EL U）與 miRNA 協(xié)同作用以影響子宮內膜基質細胞中靶基因表達(Krawczl 2015)。因此，由孕體或子宮內膜起源的 miRNA 可能有助于在植入開始和階段孕體和子宮內膜之間的交流，調節(jié)對于妊娠建立至關重要的基因的表包括子宮內膜容受性、免疫系統(tǒng)功能和孕體的發(fā)育和植入（圖 1-2）。

豬早期胚胎附植階段子宮內膜轉錄組測序分析及關鍵基因作用研究在真核細胞中廣泛表達(Memczak et al 2013; Fan et al 2015)。大多數(shù) 是 GT / AG 剪接位點，反映了 circRNA 的反向剪接。雖然已經(jīng)在小鼠了許多 circRNA，但對其他哺乳動物中的 circRNA 知之甚少。雖A 的功能尚未達成共識，但許多研究表明，circRNA 在多種真核生物出跨哺乳動物的保守性，并且其表達不受其同源線性 RNA 的調節(jié)。


本文編號：2936445