禽呼腸孤病毒（avian reovirus,ARV）屬于呼腸孤病毒科正呼腸孤病毒屬,可引起雞的病毒性關(guān)節(jié)炎、矮小綜合征、呼吸道疾病、腸道疾病、免疫抑制等。導(dǎo)致肉雞飼料轉(zhuǎn)化率低、增重下降、生長不齊,蛋雞除跛行外還會(huì)引起產(chǎn)蛋量下降、孵化率下降等,增加了養(yǎng)殖成本。自1985年我國首次報(bào)道禽呼腸孤病毒感染以來,此后多個(gè)省市地區(qū)均出現(xiàn)了該病的報(bào)道,感染情況日益加重,嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。深化該病的研究對(duì)于我國養(yǎng)雞產(chǎn)業(yè)的健康和穩(wěn)定發(fā)展具有積極的意義。本研究從疑似ARV感染的免疫肉雞體內(nèi)分離得到一株ARV,對(duì)該毒株進(jìn)行了序列分析及理化性質(zhì)的研究。同時(shí)建立了一種快速可消除攜帶污染的UDG-RT-LAMP檢測方法,并對(duì)該方法的反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,為ARV感染的防控及快速檢測提供了理論依據(jù)和新思路。本研究分別利用SPF雞胚和雞胚肝細(xì)胞（CEL）對(duì)山東濰坊地區(qū)疑似ARV感染的免疫肉雞關(guān)節(jié)病料進(jìn)行了病毒病原的分離,將分離株命名為WF株,對(duì)分離毒株進(jìn)行了序列的測定與分析、毒力的測定、動(dòng)物回歸試驗(yàn)、理化性質(zhì)的測定等試驗(yàn)。雞胚和CEL細(xì)胞接種病料處理液后出現(xiàn)的特征性病變均與報(bào)道相符。分別提取RNA,RT-PCR反應(yīng)... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LAMP引物模式圖（江彥增，2008）

FIP 中的 F2 首先與靶 DNA 的 F2c 互補(bǔ)結(jié)合（圖2-a），合成互補(bǔ)的 DNA 鏈（圖 2-b）。之后 F3 與靶 DNA 的 F3c 結(jié)合（圖 2-c），合成一條新的互補(bǔ) DNA 鏈，同時(shí) Bst DNA 聚合酶將 FIP 引導(dǎo)合成的 DNA 鏈置換解離出去（圖2-d）。被解離出的 DNA 鏈 5'的 F1c 和 F1 發(fā)生堿基自我互補(bǔ)配對(duì)，形成了環(huán)狀結(jié)構(gòu)（圖2-e），BIP 中的 B2 與解離 DNA 鏈的 B2c 互補(bǔ)結(jié)合，此時(shí)環(huán)狀結(jié)構(gòu)被重新打開，合成了新的互補(bǔ) DNA 鏈（圖 2-f）。同時(shí) B3 從 B1c 段 5'端插入，引導(dǎo)合成了另一條互補(bǔ) DNA鏈

掛宰隕砦?０澹??F1 的 3'端開始進(jìn)行自我引導(dǎo)延伸（圖3-h）。同時(shí)，F(xiàn)IP 中的 F2 與 F2c 互補(bǔ)結(jié)合，合成一條新的互補(bǔ) DNA 鏈，并將由 F1 引導(dǎo)自我延伸成的 DNA 單鏈置換解離出去，并在一端形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)（圖 3-i）。之后 B1又啟動(dòng)了自我引導(dǎo)延伸，合成了長度為靶 DNA 兩倍的 DNA 鏈（圖 3-j），同時(shí)將 FIP 引導(dǎo)合成的 DNA 鏈置換解離出去，由于其兩端存在堿基自我互補(bǔ)配對(duì)的區(qū)域，于是形成了與結(jié)構(gòu) h 互補(bǔ)的啞鈴結(jié)構(gòu)（圖 3-k）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2932406