狂犬病是一種古老的人畜共患傳染病,每年在世界各地造成超過59,000人死亡。其致病病原體狂犬病病毒（Rabies Virus,RABV）編碼五種結(jié)構(gòu)蛋白:核蛋白（N）,磷蛋白（P）,基質(zhì)蛋白（M）,糖蛋白（G）和病毒RNA聚合酶（L）。RABV進(jìn)入機(jī)體后,沿外周神經(jīng)系統(tǒng)迅速移動(dòng),最終到達(dá)中樞神經(jīng)系統(tǒng)（Central nervous system,CNS）。一旦出現(xiàn)臨床癥狀,狂犬病的死亡率接近100%。雖然狂犬病死亡率高,但是人類和動(dòng)物可以通過接種疫苗來預(yù)防狂犬病,疫苗能夠激活免疫系統(tǒng),產(chǎn)生抗體以中和病毒。自1885年以來,疫苗接種已成為保護(hù)人類免于狂犬病危害的最有效途徑。全球每年有數(shù)百萬人接種狂犬疫苗,約有25萬人因接種疫苗得到保護(hù)。我們之前的研究表明,樹突狀細(xì)胞（Dendritic cell,DC）的激活可以增強(qiáng)RABV的免疫原性。當(dāng)重組RABV過表達(dá)與DC成熟相關(guān)的細(xì)胞因子或趨化因子時(shí)能夠達(dá)到增強(qiáng)DC活化的目的。然而,這些細(xì)胞因子或趨化因子的過度表達(dá)可能會(huì)產(chǎn)生副作用。因此,需要進(jìn)一步研究通過僅增加r RABV與DC的結(jié)合來增強(qiáng)RABV免疫原性。在本研究中,構(gòu)建了融合表達(dá)DC靶向小肽... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

DC表面可用于抗體治療的受體Figure1-1surfacereceptorstargettedforantigentargetingtherapiesonDC

同樣采用融合 PCR 將 DCCp 插入 RABV G 蛋白信號(hào)肽之后。PCR 引物設(shè)計(jì)列于表 3.1。3.2.2 質(zhì)粒構(gòu)建（1） 融合 PCR融合 PCR 由兩輪 PCR 反應(yīng)組成，反應(yīng)策略如圖 3.1 第一輪又分為反應(yīng) 1 和反應(yīng)2，反應(yīng)條件為 95℃ 變性 10s，55℃ 退火 10s，72℃ 延伸 30s，循環(huán) 35 次，72℃延伸 10 min，反應(yīng)體系如表 3.2，反應(yīng) 1 的上下游引物分別是 LBNSE/G SwaⅠ-F 和Bp1-R/Cp1-R，反應(yīng) 2 的上下游引物分別是 Bp2-F/ Cp2-F 和 LBNSE/G PpuMⅠ-R；反應(yīng) 1 和反應(yīng) 2 所得的產(chǎn)物 1 和產(chǎn)物 2 經(jīng)純化試劑盒純化，作為模板參與融合 PCR 第二輪反應(yīng)（反應(yīng) 3），反應(yīng) 3 反應(yīng)條件與反應(yīng) 1 和反應(yīng) 2 相同，反應(yīng)體系如表 3.3。

rLBNSE、rLBNSE-DCBp和rLBNSE-DCCp的構(gòu)建Fig.4-1ConstructionofrLBNSE,rLBNSE-DCBpandrLBNSE-DCCp


本文編號(hào)：2930669